[發明專利]抗菌肽NX-16及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201110168592.4
• 申請日: 2011-06-22
• 公開（公告）號: CN102260325A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 胡建和;杭柏林;王青;付登峰;許明錄;王蘭;尚田田;徐彥召;劉興友
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/00;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/70;C12P21/06;A61K38/10;A61P31/00
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 樊羿

1.一種抗菌肽NX-16，其特征在于，其是具有序列表中SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的多肽，或是由SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列經環化、N末端和/或C末端的修飾、L－型氨基酸和D－型氨基酸互相轉變、序列末端缺失中的至少一種處理而得到的功能等同物的多肽。

2.一種多核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列：

（a）編碼SEQ?ID?NO：1所示的多肽的多核苷酸；或為

（b）與多核苷酸（a）互補的多核苷酸。

3.一種載體，其特征在于，含有權利要求2所述的多核苷酸。

4.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，含有權利要求3所述的載體。

5.權利要求1所述抗菌肽NX-16的制備方法，包括如下步驟：

（1）將序列表中SEQ?ID?NO：1所示氨基酸序列按3個重復進行串聯，并根據大腸桿菌密碼子的偏愛性，設計該串聯氨基酸序列的串聯基因，分別在兩端再加入核酸限制性內切酶識別位點和保護性堿基，形成待表達的目的基因；

（2）針對上述目的基因，利用SOEingPCR引物設計方法設計四條互補的引物，四條引物中含有重疊堿基片段，運用重疊區擴增拼接PCR法合成目的基因；

（3）將目的基因和原核表達載體pET30a(+)雙酶切后進行連接，轉化大腸桿菌BL21，并進行鑒定；

（4）用IPTG進行誘導表達，菌體經超聲破碎，用SDS-PAGE分析表達產物；

（5）表達產物經透析、復性后，用激肽釋放酶酶解，獲得抗菌肽NX-16。

6.根據權利要求5所述抗菌肽NX-16的制備方法，其特征在于，所述目的基因序列如SEQ?ID?NO：2所示。

7.根據權利要求5所述抗菌肽NX-16的制備方法，其特征在于，所述四條互補的引物的序列如SEQ?ID?NO：3～6所示。

8.一種能與權利要求1所述抗菌肽NX-16特異性結合的抗體。

9.一種藥物組合物，其特征在于，它含有安全有效量的權利要求1所述的抗菌肽NX-16以及醫學上可接受的載體。

10.權利要求1所述抗菌肽NX-16在制備殺菌劑中的應用。