[發明專利]一種生產高活性和高純度利福霉素SV的方法

有效

• 申請號: 201110168410.3
• 申請日: 2011-06-21
• 公開（公告）號: CN102286398A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 趙國屏;趙維;袁華;鐘怡;覃重軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/09;C12N15/53;C12N15/54;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀

1.一種生產利福霉素SV或利福霉素S的菌株，其特征在于，所述菌株中的細胞色素P450基因和/或轉酮酶基因失活或其所編碼的酶失活，條件是所述菌株不是保藏號為CGMCC?4.5720的地中海擬無枝菌酸菌。

2.如權利要求1所述的菌株，其特征在于，所述細胞色素P450基因和/或轉酮酶基因選自下組：

(i)具有SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：23和/或SEQ?ID?NO：24所示序列的核苷酸序列；

(ii)與(i)中序列同源的序列；

(iii)在嚴格條件下與(i)或(ii)限定的序列雜交、且編碼細胞色素P450或轉酮酶的序列；和/或

(iv)核苷酸序列與(i)或(ii)有85％以上序列相同性、且編碼細胞色素P450或轉酮酶的序列。

3.如權利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是天然的菌株或是經遺傳工程改造的菌株。

4.如權利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是產利福霉素的地中海擬無枝菌酸菌(Amycolatopsis?mediterranei)或由產利福霉素的地中海擬無枝菌酸菌(Amycolatopsis?mediterranei)經遺傳工程改造而得。

5.如權利要求3所述的菌株，其特征在于，所述遺傳工程改造通過選自下組的方法進行：基因敲除、基因置換、基因沉默、RNA干擾或點突變。

6.一種獲得生產利福霉素SV或利福霉素S的菌株的方法，所述方法包括步驟：

(a)提供生產利福霉素的菌株；

(b)使得所述菌株中的細胞色素P450基因和/或轉酮酶基因失活或其所編碼的酶失活。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述失活是通過選自下組的遺傳工程改造實現的：基因敲除、基因置換、基因沉默、RNA干擾、點突變。

8.一種篩選生產利福霉素SV或利福霉素S的菌株的方法，所述方法包括：

(a′)提供生產利福霉素的菌株；

(b′)對所述菌株的細胞色素P450基因和/或轉酮酶基因進行檢測，或對其所編碼的酶的活性進行測定，

如果所述菌株中沒有細胞色素P450基因和/或轉酮酶基因或其所編碼的酶的活性，或該活性顯著低于生產利福霉素B的陽性對照菌株，則表明該菌株可用于生產利福霉素SV。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述基因的檢測是通過選自下組的方法測定的：PCR測序或Southern雜交。

10.一種生產利福霉素SV、利福霉素S或以其衍生物的方法，所述方法包括：

A)提供權利要求1-5中任一項所述的菌株、用權利要求6-7中任一項所述的方法產生的菌株、或用權利要求8-9中任一項所述的方法篩選得到的菌株；

B)用所述菌株生產利福霉素SV或利福霉素S；以及

C)任選地，用步驟B)所得的利福霉素SV或利福霉素S進一步生產選自下組的利福霉素衍生物：利福布汀、利福噴汀或利福平。

11.細胞色素P450基因或轉酮酶基因或它們所編碼的蛋白的用途，其用于調控利福霉素SV轉化為利福霉素B。

12.如權利要求11所述的用途，其特征在于，所述的細胞色素P450或轉酮酶基因或它們所編碼的蛋白來源于地中海擬無枝菌酸菌(Amycolatopsis?mediterranei)。

13.如權利要求11所述的用途，其特征在于，所述的細胞色素P450基因或轉酮酶基因或它們所編碼的蛋白來自產利福霉素B的菌株。

14.如權利要求11所述的用途，其特征在于，所述的細胞色素P450或轉酮酶基因或它們所編碼的蛋白是單獨應用或組合應用的。