[發(fā)明專利]一種抗結(jié)核病藥物高通量篩選模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110166552.6
• 申請(qǐng)日: 2011-06-20
• 公開（公告）號(hào): CN102839144A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岑山;賈平平;張義;李曉宇;周金明;殷霄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/62;C12N15/63;C07K19/00;C12Q1/66;G01N21/64;C12R1/32
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

1.一種抗結(jié)核病藥物高通量篩選模型的構(gòu)建方法，其特征在于，其是通過(guò)構(gòu)建外源表達(dá)來(lái)自于結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis)中的CFP-10蛋白和報(bào)告蛋白的融合蛋白的重組海分枝桿菌，以該重組菌作為針對(duì)ESX-1分泌系統(tǒng)的抗結(jié)核病藥物高通量篩選模型，向含有該重組菌的培養(yǎng)液中加入待篩選的藥物化合物，培養(yǎng)一段時(shí)間后離心取上清測(cè)定報(bào)告蛋白的表達(dá)量或活性，以此來(lái)評(píng)價(jià)該藥物化合物對(duì)ESX-1分泌系統(tǒng)的抑制活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述報(bào)告蛋白為熒光素酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶、β-半乳糖苷酶、分泌型堿性磷酸酶或熒光蛋白家族中的成員。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述報(bào)告蛋白為熒光素酶。

4.含有CFP-10蛋白和熒光素酶的融合蛋白。

5.編碼權(quán)利要求4所述融合蛋白的基因。

6.含有權(quán)利要求5所述基因的載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載體，其特征在于，其出發(fā)載體為pMV261。

8.含有權(quán)利要求6或7所述載體的宿主細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，其為海分枝桿菌(Mycobacterium?marinum)。

10.權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的基因、權(quán)利要求6或7所述的載體、權(quán)利要求8或9所述的宿主細(xì)胞在篩選抗結(jié)核病藥物中的應(yīng)用。