[發明專利]一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法

無效

• 申請號: 201110165770.8
• 申請日: 2011-06-20
• 公開（公告）號: CN102277422A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 姜毓君;滿朝新;楊秀茹;盧雁;單藝;蔣亞男;王旻;謝鯤昊;胡惠秩;劉穎;薛玉清
• 申請（專利權）人: 黑龍江省乳品工業技術開發中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 韓末洙

1.一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于快速檢測單增李斯特菌活菌的方法，按以下步驟進行：一、受檢乳樣的前處理：向1mL受檢乳中加入PMA，使PMA的濃度為50μmol/L，然后置于暗處放置5～30min，接著置于距650W鹵素燈15～20cm處，曝光5～30min；二、樣品DNA的提?。合虿襟E一處理后的受檢乳中加入150μL濃度為250g/L的檸檬酸鈉和100μL濃度為1mol/L的氫氧化鈉，然后于10000r/min離心2min，棄上清，得沉淀；三、用質量濃度為0.85％的生理鹽水洗滌沉淀，然后于10000r/min離心1min，棄上清，用細菌基因組DNA提取試劑盒進行DNA提取，得提取物；四、以提取物作為模板進行LAMP擴增，得到LAMP擴增產物；五、鑒定：取5μL?LAMP擴增產物，點樣于質量濃度為2％的瓊脂糖凝膠中，以100V電壓在1×TAE電泳緩沖液中電泳30min，然后在凝膠成像系統中成像，即完成檢測。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中置于暗處放置10～20min。

3.根據權利要求1所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中置于暗處放置15min。

4.根據權利要求1或2所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中置于距650W鹵素燈15cm處。

5.根據權利要求1或2所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中置于距650W鹵素燈20cm處。

6.根據權利要求4所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中曝光10～20min。

7.根據權利要求4所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟一中曝光5min。

8.根據權利要求6所述的一種快速檢測液體乳中單增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步驟四中LAMP擴增的反應體系為25μL反應體系，由下列成分組成：

LAMP擴增條件為：95℃5min，迅速置于4℃加入Bst酶，63℃60min，80℃2min。