[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)原料乳及乳制品中β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)裝置及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110162413.6
• 申請(qǐng)日: 2011-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN102221547A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝巖黎;韓小賢;林敏剛;張?chǎng)螢t;李雪琴;姚永志
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N33/52
• 代理公司: 鄭州科維專利代理有限公司 41102
• 代理人: 張欣棠;馬忠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用于檢測(cè)原料乳和乳制品中β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)裝置及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

β-內(nèi)酰胺酶（β-lactamase），俗稱生鮮牛乳抗生素分解劑，又名解抗劑或金玉蘭酶制劑，它是由革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌產(chǎn)生和分泌的，可選擇性分解牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺類抗生素，使微生物法、酶聯(lián)免疫法等常規(guī)的檢測(cè)方法失效，從而無法正確判斷是否為“無抗奶”，掩蓋抗生素超標(biāo)的事實(shí)。

β-內(nèi)酰胺類抗生素是在牛奶生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的抗生素，用于治療牛乳房炎和其他細(xì)菌感染性疾病，如果不嚴(yán)格按照規(guī)定治療牛乳炎等疾病，濫用抗生素，就會(huì)造成牛乳中的抗生素超標(biāo)。由于抗生素的存在，一方面難以成為安全合格的產(chǎn)品，另一方面，還會(huì)影響酸奶、奶酪等奶制品的加工生產(chǎn)。Korycka-Dahl?M.等（1985）利用β-內(nèi)酰胺酶降解牛奶中殘留的抗生素，可降低至常規(guī)檢測(cè)方法無法檢測(cè)的水平。一些不法分子將β-內(nèi)酰胺酶用作牛奶中抗生素的分解劑，以掩蓋其抗生素殘留超標(biāo)的事實(shí)，從而使抗生素超標(biāo)奶變成合格奶，這就造成了外源性β-內(nèi)酰胺酶的違法添加。

β-內(nèi)酰胺酶能夠使青霉素內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)破壞而失去活性，導(dǎo)致青霉素、頭孢菌素等抗生素類藥物耐藥性增高，從而大大降低了人們抵抗傳染病的能力，給消費(fèi)者的身體健康帶來危害。青霉素在β-內(nèi)酰胺酶作用下，酶中親核性基團(tuán)向β-內(nèi)酰胺環(huán)進(jìn)攻，開環(huán)后可脫羧重排生成中間體青霉噻唑酸。以青霉素為代表的β-內(nèi)酰胺類抗生素過敏反應(yīng)非常普遍，引起過敏反應(yīng)的基本物質(zhì)有兩種，一種是青霉素裂解生成一些青霉噻唑酸，與蛋白質(zhì)結(jié)合形成抗原而致敏。另一種過敏源是一些高聚物，為β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)后自身聚合而成，聚合程度越高，過敏反應(yīng)越強(qiáng)。雖然由于添加β-內(nèi)酰胺酶造成青霉素過敏的病例并未被研究證明，但根據(jù)青霉素的過敏機(jī)理，以及β-內(nèi)酰胺酶的添加可能會(huì)造成β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性的原因，確實(shí)應(yīng)該對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的濫加提高警惕，嚴(yán)加管理。有些微生物雖然可以產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，但由于采奶方式、牛奶的組分、消毒方法和包裝儲(chǔ)存方法等不適于產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶微生物的生存，在非人為添加β-內(nèi)酰胺酶的條件下是無法檢測(cè)到微生物產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶的。

2009年2月4日，根據(jù)衛(wèi)生部等九部門《關(guān)于開展全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項(xiàng)整治的緊急通知》的規(guī)定，為配合全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項(xiàng)整治工作的深入開展，專項(xiàng)整治專家委員會(huì)提出《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單》，其中就包括β-內(nèi)酰胺酶。外源性β-內(nèi)酰胺酶是我國(guó)不允許在食品中使用的化學(xué)物質(zhì)，它的使用掩蓋了牛奶中抗生素的殘留的事實(shí)。

為了廣大消費(fèi)者的身體健康，維護(hù)乳制品市場(chǎng)良好的競(jìng)爭(zhēng)環(huán)境，建立一種簡(jiǎn)單、方便、經(jīng)濟(jì)的乳制品中β-內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)試紙已經(jīng)是一個(gè)亟需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的提供一種原料乳及乳制品中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試紙及其標(biāo)準(zhǔn)比色卡，并提供一種利用該試紙方便、快捷測(cè)定樣品中β-內(nèi)酰胺酶含量的方法。

一種用于檢測(cè)原料乳及乳制品中β-內(nèi)酰胺酶的裝置，包括檢測(cè)試紙和β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)比色卡；其中所述的檢測(cè)試紙由過濾層(1)、顯色層(2)、吸水材料層(3)和基板(4)組成，過濾層(1)、顯色層(2)、吸水材料層(3)粘貼在基板(4)上，且同時(shí)依次連接；其中所述的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)比色卡由9個(gè)色塊(5)組成，從淺到深對(duì)應(yīng)于β-內(nèi)酰胺酶濃度梯度分別為0U/mL、6U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、150U/mL、200U/mL、250U/mL。

所述的檢測(cè)試紙過濾層(1)用玻璃棉制成，顯色層(2)由醋酸纖維素膜制成，吸水層(3)由中性濾紙制成，基板(4)由PVC薄片制成。

所述顯色層(2)的制備包括步驟：配置0.5%～1.0?%?2,2'-聯(lián)喹啉乙醇溶液和0.1~0.3mol/L?CuSO₄溶液，混合均勻后，將醋酸纖維素膜浸入上述混合溶液5~10min后取出，放入真空干燥箱內(nèi)40～80℃干燥20～50min后組裝成檢測(cè)試紙。

所述β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)比色卡的具體制備步驟如下：

(1)配制青霉素底物濃度為5000U/mL的溶液9份，分別加入濃度為0U/mL、6U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、150U/mL、200U/mL、250U/mL?β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合均勻后37℃水浴60min；