[發明專利]賴氨酸的流加發酵制備

有效

• 申請號: 201110151495.4
• 申請日: 2011-06-08
• 公開（公告）號: CN102234666A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: 馬吉銀;陳崇安;孟剛;曹洪;程耀東;劉鑫
• 申請（專利權）人: 寧夏伊品生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P13/08
• 分類號: C12P13/08;C12R1/15
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.流加發酵L-賴氨酸的方法，其包括：

(1)將表達吡啶核苷酸轉氫酶變體的工程菌接入第一發酵罐于31-38℃培養10-20小時，其中所述吡啶核苷酸轉氫酶變體相對于野生型吡啶核苷酸轉氫酶的活性提高；

(2)將步驟(1)獲得的培養液以3-7％(體積)的接種量接種于第二發酵罐，于36-40℃培養3-8小時；

(3)向第二發酵罐持續流加糖，其中糖的每小時流加量為第二發酵罐內培養液量的0.2-0.35％(重量)，進行10-18小時；和

(4)向第二發酵罐持續流加糖和氮源，其中糖的每小時流加量為第二發酵罐內培養液量的0.3-0.5％(重量)，而且氮源的每小時流加量為第二發酵罐內培養液量的0.1-0.25％(重量)，進行30-65小時，優選50-55小時。

2.權利要求1所述的方法，其中第一發酵罐中的培養基配方為：每18立方米培養基中含，葡萄糖500-750公斤，甘蔗糖蜜50-300公斤，玉米漿400-600公斤，KH₂PO₄?30-80公斤，MgSO₄·7H₂O?3-15公斤，FeSO₄·7H₂O?0.1-1公斤，MnSO₄·7H₂O0.1-1公斤，生物素5-30克，和葉酸3-10克。

3.權利要求2所述的方法，其中第一發酵罐中的培養基配方為：每18立方米培養基中含，葡萄糖600公斤，甘蔗糖蜜200公斤，玉米漿520公斤，KH₂PO₄?45公斤，MgSO₄·7H₂O?7公斤，FeSO₄·7H₂O?0.5公斤，MnSO₄·7H₂O?0.5公斤，生物素12克，和葉酸5克。

4.權利要求1所述的方法，其中第二發酵罐的培養基配方為：每315立方米培養基中含，葡萄糖10000-15000公斤，甘蔗糖蜜50-3000公斤，玉米漿10000-15000公斤，KH₂PO₄?700-1200公斤，MgSO₄·7H₂O?5-220公斤，FeSO₄·7H₂O?5-25公斤，MnSO₄·7H₂O?5-220公斤，生物素150-300克，和葉酸50-120克，優選其中第二發酵罐的培養基配方為：每315立方米培養基中含，葡萄糖12000公斤，甘蔗糖蜜1000公斤，玉米漿12000公斤，KH₂PO₄?1000公斤，MgSO₄·7H₂O?100公斤，FeSO₄·7H₂O?12，MnSO₄·7H₂O?120公斤，生物素200克，和葉酸85克。

5.權利要求1所述的方法，其中步驟(3)和(4)中的糖是葡萄糖；和/或，其中步驟(4)中的氮源是無機氮源，優選是硫酸銨或氯化銨。

6.權利要求1所述的方法，其中步驟(3)和(4)中的溫度與步驟(2)中的溫度相同，優選為38-39℃。

7.權利要求1所述的方法，其中工程菌是棒狀桿菌。

8.權利要求1所述的方法，其中吡啶核苷酸轉氫酶變體的編碼多核苷酸依次編碼吡啶核苷酸轉氫酶α亞基變體和吡啶核苷酸轉氫酶β亞基變體。

9.權利要求8所述的方法，其中吡啶核苷酸轉氫酶α亞基變體在M102、L127或Q322的位置上被其他天然氨基酸替換，優選替換選自M102L、L127R和Q322K，最優選其氨基酸序列如SEQ?ID?No：2所示；和，其中吡啶核苷酸轉氫酶β亞基變體在A398或D400的位置上被其他天然氨基酸替換，優選替換選自A398S和D400H，最優選其氨基酸序列如SEQ?ID?No：4所示。

10.權利要求1-9之任一所述的方法制備的發酵液，其中L-賴氨酸的含量不低于90g/L，優選不低于120g/L。