[發明專利]雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法

有效

• 申請號: 201110149270.5
• 申請日: 2011-06-03
• 公開（公告）號: CN102253023A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 袁建輝;楊慧;劉建軍;徐新云;柯躍斌;程錦泉;莊志雄
• 申請（專利權）人: 深圳市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12Q1/02
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所 44248
• 代理人: 胡吉科;孫偉

1.一種雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法，其特征在于：包括如下步驟：

A）培養細胞，種96孔黑板，置于細胞培養箱中培養；

B）培養24?h后，棄去培養基，PBS洗滌2~3次，選用不同濃度的雪卡毒素染毒細胞；

C）染毒12~24?h后，棄去培養基，加入鈉離子熒光探針染色，置于細胞培養箱中避光孵育；

D）平衡鹽溶液洗滌2~3次后，多功能酶標儀檢測各孔的熒光強度；

E）建立鈉離子熒光探針檢測法的標準曲線。

2.根據權利要求1所述的雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法，其特征在于：所述步驟A）包括：培養小鼠腦神經瘤細胞（N-2a），待細胞長至80~90%匯合度，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化收集細胞，離心后去上清液，加入RPMI-1640培養基重懸細胞使其密度為3×10⁵個/mL，接種100?μL細胞懸液于96孔黑板中，置于細胞培養箱中培養。

3.根據權利要求1所述的雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法，其特征在于：所述步驟B）包括：設置實驗組：每孔加入90?μL0.25?mmol/L的烏苯苷溶液和10?μL?雪卡毒素標準品（P-CTX-1）或樣品溶液，雪卡毒素標準品的濃度梯度為1~10⁷?pg/L；設置空白對照組：每孔加入100?μL?RPMI-1640基礎培養基；設置溶劑對照組：每孔加入90?μL0.25?mmol/L的烏苯苷溶液和10?μL?10%甲醇。

4.根據權利要求1所述的雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法，其特征在于：所述步驟C）的染毒時間為18?h。

5.根據權利要求1至4中任一項所述雪卡毒素鈉離子熒光探針檢測法，其特征在于：所述鈉離子熒光探針為CoroNa^TM?Green。