[發明專利]龍腦樟樹工廠化育苗方法

無效

• 申請號: 201110147599.8
• 申請日: 2011-06-02
• 公開（公告）號: CN102217548A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 林文革;陳細萍;曹冬萍;劉秀芳;徐進芳
• 申請（專利權）人: 地緣（廈門）生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門市誠得知識產權代理事務所 35209
• 代理人: 方惠春

技術領域

本發明涉及龍腦樟樹工廠化育苗方法，具體是通過調整培養基和培養條件來提高育苗效率。

背景技術

龍腦樟樹葉是冰片的天然植物資源。樟樹喜光，喜溫暖濕潤氣候，對土壤要求不嚴，較耐水濕，但不耐干旱、瘠薄和鹽堿土。由于早期對樟的開發利用多以提取精油為主，過度砍伐，對資源嚴重破壞，導致一些優良資源開始枯竭，加之市場需求不斷擴增，因此，尋找一種有效的樟樹繁殖方法具重要意義。

目前樟樹以種子繁殖為主，生產上出現種子發芽率低，成苗參差不齊且后代苗木變異較大等問題。利用組織培養，選取優良材料進行擴繁，不僅能快速繁殖生產苗木，且能保持母本的優良遺傳性狀。目前國內對于樟樹組織培養的研究主要集中在無性快繁體系建立(鄒暉，2009）、試管苗離體保存(吳金壽，2005）、以及玻璃化苗解決方法探索(魏琴，2006）等方面，但各學者間的觀點存在一定分歧，且全方面探討指導樟工廠化生產的體系有待進一步完善；同時，現有龍腦樟組培技術中普遍存在增殖系數低，苗木易褐化且移栽存活率低等問題，長期制約著龍腦樟組培快繁的發展，因此因而需要進一步篩選優化配方，提高分化率和移苗成活率。

發明內容

本發明提供一種龍腦樟樹工廠化育苗方法，可以解決現有龍腦樟組培技術中普遍存在增殖系數低，苗木易褐化且移栽存活率低等問題。

為了實現上述目的，本發明的解決方案如下：

龍腦樟樹工廠化育苗方法，通過以下步驟實現：

（1）外植體的采集：采取前三天先噴灑多菌靈溶液進行預處理；選取龍腦含量高的優良單株，取主干下部幼嫩萌枝條作為外植體；

（2）無菌材料的獲得：枝條取下后用重量比0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡處理，飽和洗滌液浸泡處理，再用流水沖洗；再剪成帶1-2個節間的莖段，用體積比75%乙醇溶液處理；然后用重量比0.1%的升汞溶液浸泡處理，最后枝條經無菌水清洗后接種于芽誘導培養基上；

（3）無菌培養：將獲得的無菌材料在合適條件的光、溫、培養基的管理下進行初代培養、增殖培養和生根培養，促使樹苗最大化生長；

（4）移栽：將生根后的樹苗轉移至移栽大棚進行煉苗，5-10天后取出樹苗，洗凈根部培養基，用重量比0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡處理，再清洗，沾取ABT生根粉，移栽入基質中，移栽后做好田間溫濕度管理，達到符合生產用苗的標準。

步驟（3）中初代培養是MS、6-BA（6-芐胺基嘌呤）和NAA（a-萘乙酸）的混合物，其中6-BA和NAA按質量體積比計分別為2.0?mg/L和0.1?mg/L，其余成分為MS。增殖培養中采用兩種不同的培養基交替使用。生根培養的培養基采用1/2改良MS、IBA（吲哚-3-丁酸）和IAA（3-吲哚乙酸）的混合物，IBA和IAA按質量體積比計分別為0.5?mg/L和0.4?mg/L，其余成分為1/2改良MS，培養基中蔗糖濃度為20?g/L。改良MS培養基是將MS基本培養基中NH₄NO₃（硝酸銨）濃度調為825?mg/L，其余組分濃度不變；1/2改良MS是將改良MS中大量元素的含量降低一倍，其余組分含量不變。初代培養和增殖培養采用的培養基中含有卡拉膠6.7?g/L，蔗糖30g/L；生根培養采用的培養基中含有卡拉膠6.7?g/L，蔗糖20g/L；初代培養、增殖培養和生根培養的培養基pH值均為5.8-6.0。

上述培養條件采用：光照時間12±2?小時，光照強度2000-3500?lx，溫度25±2℃。

步驟（4）中基質采用草炭:珍珠巖為3:1。

上述增殖培養采用的兩種培養基均是改良MS、BA和NAA?的混合物，其中改良MS是將MS中的NH₄NO₃濃度調為825?mg/L，其余組分濃度不變，兩種增殖培養的不同在于BA和NAA的質量體積比不同，其中一種培養基在以改良MS為基本培養基的前提下，每升添加BA和NAA分別為?2.0?mg和0.05?mg，另一培養基則是在以改良MS為基本培養基的前提下，每升添加BA和NAA分別為?1.0?mg和0.05?mg

本發明旨在選取龍腦含量高的優良單株，取其主干下部幼嫩萌枝作為外植體，建立組織培養技術體系，并運用于工廠化育苗生產。可運用本發明中的步驟建立一套完整的龍腦樟苗木工廠化生產規程，從而提高工廠化效率。本發明提出兩種不同的增殖培養基交替使用，提高龍腦樟的增殖系數，同時不斷不斷篩選和完善龍腦樟組培的組織培養基、栽培基質和相應的培養和栽培參數解決龍腦樟組培過程中普遍存在的褐化問題，同時提高移栽存活率。