[發(fā)明專利]龍腦樟樹工廠化育苗方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110147599.8
• 申請(qǐng)日: 2011-06-02
• 公開（公告）號(hào): CN102217548A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林文革;陳細(xì)萍;曹冬萍;劉秀芳;徐進(jìn)芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 地緣（廈門）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 廈門市誠(chéng)得知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 35209
• 代理人: 方惠春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及龍腦樟樹工廠化育苗方法，具體是通過調(diào)整培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件來(lái)提高育苗效率。

背景技術(shù)

龍腦樟樹葉是冰片的天然植物資源。樟樹喜光，喜溫暖濕潤(rùn)氣候，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，較耐水濕，但不耐干旱、瘠薄和鹽堿土。由于早期對(duì)樟的開發(fā)利用多以提取精油為主，過度砍伐，對(duì)資源嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致一些優(yōu)良資源開始枯竭，加之市場(chǎng)需求不斷擴(kuò)增，因此，尋找一種有效的樟樹繁殖方法具重要意義。

目前樟樹以種子繁殖為主，生產(chǎn)上出現(xiàn)種子發(fā)芽率低，成苗參差不齊且后代苗木變異較大等問題。利用組織培養(yǎng)，選取優(yōu)良材料進(jìn)行擴(kuò)繁，不僅能快速繁殖生產(chǎn)苗木，且能保持母本的優(yōu)良遺傳性狀。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于樟樹組織培養(yǎng)的研究主要集中在無(wú)性快繁體系建立(鄒暉，2009）、試管苗離體保存(吳金壽，2005）、以及玻璃化苗解決方法探索(魏琴，2006）等方面，但各學(xué)者間的觀點(diǎn)存在一定分歧，且全方面探討指導(dǎo)樟工廠化生產(chǎn)的體系有待進(jìn)一步完善；同時(shí)，現(xiàn)有龍腦樟組培技術(shù)中普遍存在增殖系數(shù)低，苗木易褐化且移栽存活率低等問題，長(zhǎng)期制約著龍腦樟組培快繁的發(fā)展，因此因而需要進(jìn)一步篩選優(yōu)化配方，提高分化率和移苗成活率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種龍腦樟樹工廠化育苗方法，可以解決現(xiàn)有龍腦樟組培技術(shù)中普遍存在增殖系數(shù)低，苗木易褐化且移栽存活率低等問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的解決方案如下：

龍腦樟樹工廠化育苗方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

（1）外植體的采集：采取前三天先噴灑多菌靈溶液進(jìn)行預(yù)處理；選取龍腦含量高的優(yōu)良單株，取主干下部幼嫩萌枝條作為外植體；

（2）無(wú)菌材料的獲得：枝條取下后用重量比0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡處理，飽和洗滌液浸泡處理，再用流水沖洗；再剪成帶1-2個(gè)節(jié)間的莖段，用體積比75%乙醇溶液處理；然后用重量比0.1%的升汞溶液浸泡處理，最后枝條經(jīng)無(wú)菌水清洗后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；

（3）無(wú)菌培養(yǎng)：將獲得的無(wú)菌材料在合適條件的光、溫、培養(yǎng)基的管理下進(jìn)行初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，促使樹苗最大化生長(zhǎng)；

（4）移栽：將生根后的樹苗轉(zhuǎn)移至移栽大棚進(jìn)行煉苗，5-10天后取出樹苗，洗凈根部培養(yǎng)基，用重量比0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡處理，再清洗，沾取ABT生根粉，移栽入基質(zhì)中，移栽后做好田間溫濕度管理，達(dá)到符合生產(chǎn)用苗的標(biāo)準(zhǔn)。

步驟（3）中初代培養(yǎng)是MS、6-BA（6-芐胺基嘌呤）和NAA（a-萘乙酸）的混合物，其中6-BA和NAA按質(zhì)量體積比計(jì)分別為2.0?mg/L和0.1?mg/L，其余成分為MS。增殖培養(yǎng)中采用兩種不同的培養(yǎng)基交替使用。生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基采用1/2改良MS、IBA（吲哚-3-丁酸）和IAA（3-吲哚乙酸）的混合物，IBA和IAA按質(zhì)量體積比計(jì)分別為0.5?mg/L和0.4?mg/L，其余成分為1/2改良MS，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為20?g/L。改良MS培養(yǎng)基是將MS基本培養(yǎng)基中NH₄NO₃（硝酸銨）濃度調(diào)為825?mg/L，其余組分濃度不變；1/2改良MS是將改良MS中大量元素的含量降低一倍，其余組分含量不變。初代培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基中含有卡拉膠6.7?g/L，蔗糖30g/L；生根培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基中含有卡拉膠6.7?g/L，蔗糖20g/L；初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基pH值均為5.8-6.0。

上述培養(yǎng)條件采用：光照時(shí)間12±2?小時(shí)，光照強(qiáng)度2000-3500?lx，溫度25±2℃。

步驟（4）中基質(zhì)采用草炭:珍珠巖為3:1。

上述增殖培養(yǎng)采用的兩種培養(yǎng)基均是改良MS、BA和NAA?的混合物，其中改良MS是將MS中的NH₄NO₃濃度調(diào)為825?mg/L，其余組分濃度不變，兩種增殖培養(yǎng)的不同在于BA和NAA的質(zhì)量體積比不同，其中一種培養(yǎng)基在以改良MS為基本培養(yǎng)基的前提下，每升添加BA和NAA分別為?2.0?mg和0.05?mg，另一培養(yǎng)基則是在以改良MS為基本培養(yǎng)基的前提下，每升添加BA和NAA分別為?1.0?mg和0.05?mg

本發(fā)明旨在選取龍腦含量高的優(yōu)良單株，取其主干下部幼嫩萌枝作為外植體，建立組織培養(yǎng)技術(shù)體系，并運(yùn)用于工廠化育苗生產(chǎn)。可運(yùn)用本發(fā)明中的步驟建立一套完整的龍腦樟苗木工廠化生產(chǎn)規(guī)程，從而提高工廠化效率。本發(fā)明提出兩種不同的增殖培養(yǎng)基交替使用，提高龍腦樟的增殖系數(shù)，同時(shí)不斷不斷篩選和完善龍腦樟組培的組織培養(yǎng)基、栽培基質(zhì)和相應(yīng)的培養(yǎng)和栽培參數(shù)解決龍腦樟組培過程中普遍存在的褐化問題，同時(shí)提高移栽存活率。