[發(fā)明專利]不含基因組DNA的總RNA制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110146840.5
• 申請日: 2011-06-02
• 公開（公告）號: CN102286459A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設計）人: 朱國萍;徐蕾;凌烈鋒;王鵬;曹正宇;宋平;呂俊;靳明明;徐雷雷;裴云云
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H21/02;C07H1/06
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 方南

1.不含基因組DNA的總RNA制備方法，包括以下步驟：

a)使用重懸液重懸需要提取的生物材料；

b)加入與重懸液體積相同的十二烷基硫酸鈉溶液，室溫裂解3-5分鐘，或65度裂解0.5-1分鐘；

c)加入酸性醋酸鉀溶液，離心，去除出現(xiàn)的沉淀，取上清，醋酸鉀和十二烷基硫酸鈉溶液摩爾比值為1∶0.9-1.1；

d)將c)步驟所得上清加入酸性醋酸鉀溶液，硫氰酸胍貯液，使醋酸鉀終濃度為750mmol/L，硫氰酸胍為1.5mol/L；加入與上清、酸性醋酸鉀溶液，硫氰酸胍貯液的總體積相等的酚抽提液，振蕩混勻，離心，吸取水相，在水相中加入無水乙醇，混勻后，-20度靜置10分鐘，離心，棄上清；

e)將所得RNA沉淀用洗滌液洗滌兩次，空氣中晾干，然后加入超純水溶解，即可。

2.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的重懸液為50±10mmol/L葡萄糖和10±2mmol/L乙二酸四乙酸鈉(EDTA)的混合溶液。

3.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的生物材料為細菌菌體，菌體與重懸液的質量/體積比為20-50mg/100μL。

4.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的十二烷基硫酸鈉溶液液的重量濃度為為2±0.2％。

5.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的酸性醋酸鉀溶液包含3±0.2mol/L醋酸鉀和6.5±0.4mol/L醋酸，pH為5.0±0.05。

6.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：?所述的硫氰酸胍貯液濃度為4.5±0.1mol/L。

7.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述酚抽提液為水飽和酚∶氯仿∶異戊醇的混合物，水飽和酚∶氯仿∶異戊醇體積比為125∶24∶1。

8.根據(jù)權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的洗滌液為70±5％乙醇，50±5mmol/L醋酸鈉，pH?5.2±0.05。?