[發明專利]不含基因組DNA的總RNA制備方法有效
| 申請號： | 201110146840.5 | 申請日： | 2011-06-02 |
| 公開（公告）號： | CN102286459A | 公開（公告）日： | 2011-12-21 |
| 發明（設計）人： | 朱國萍;徐蕾;凌烈鋒;王鵬;曹正宇;宋平;呂俊;靳明明;徐雷雷;裴云云 | 申請（專利權）人： | 安徽師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C07H21/02;C07H1/06 |
| 代理公司： | 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107 | 代理人： | 方南 |
| 地址： | 241000 安徽省*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基因組 dna rna 制備 方法 | ||
1.不含基因組DNA的總RNA制備方法，包括以下步驟：
a)使用重懸液重懸需要提取的生物材料；
b)加入與重懸液體積相同的十二烷基硫酸鈉溶液，室溫裂解3-5分鐘，或65度裂解0.5-1分鐘；
c)加入酸性醋酸鉀溶液，離心，去除出現的沉淀，取上清，醋酸鉀和十二烷基硫酸鈉溶液摩爾比值為1∶0.9-1.1；
d)將c)步驟所得上清加入酸性醋酸鉀溶液，硫氰酸胍貯液，使醋酸鉀終濃度為750mmol/L，硫氰酸胍為1.5mol/L；加入與上清、酸性醋酸鉀溶液，硫氰酸胍貯液的總體積相等的酚抽提液，振蕩混勻，離心，吸取水相，在水相中加入無水乙醇，混勻后，-20度靜置10分鐘，離心，棄上清；
e)將所得RNA沉淀用洗滌液洗滌兩次，空氣中晾干，然后加入超純水溶解，即可。
2.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的重懸液為50±10mmol/L葡萄糖和10±2mmol/L乙二酸四乙酸鈉(EDTA)的混合溶液。
3.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的生物材料為細菌菌體，菌體與重懸液的質量/體積比為20-50mg/100μL。
4.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的十二烷基硫酸鈉溶液液的重量濃度為為2±0.2％。
5.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的酸性醋酸鉀溶液包含3±0.2mol/L醋酸鉀和6.5±0.4mol/L醋酸，pH為5.0±0.05。
6.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：?所述的硫氰酸胍貯液濃度為4.5±0.1mol/L。
7.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述酚抽提液為水飽和酚∶氯仿∶異戊醇的混合物，水飽和酚∶氯仿∶異戊醇體積比為125∶24∶1。
8.根據權利要求1所述的不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的洗滌液為70±5％乙醇，50±5mmol/L醋酸鈉，pH?5.2±0.05。?
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