[發明專利]條件表達豬IκBα基因野生型和突變型的DNA片段

有效

• 申請號: 201110146482.8
• 申請日: 2011-06-01
• 公開（公告）號: CN102286475A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 楊述林;李和剛;李奎
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C07K14/47
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種表達盒，為雙鏈DNA，自上游至下游依次包括如下元件：啟動子、Loxp序列、IκBα蛋白的編碼基因、終止序列甲、篩選基因、所述Loxp序列、mIκBα蛋白的編碼基因和終止序列乙；所述IκBα蛋白如序列表的序列14所示；所述mIκBα蛋白如序列表的序列15所示。

2.如權利要求1所述的表達盒，其特征在于：所述IκBα蛋白的編碼基因如序列表的序列1自5’末端第741至1817位核苷酸所示；所述mIκBα蛋白的編碼基因如序列表的序列1自5’末端第5125至6201位核苷酸所示；所述Loxp序列如序列表的序列1自5’末端第700至733位核苷酸所示；所述終止序列甲和所述終止序列乙為序列表的序列1自5’末端第1840至2067位核苷酸所示的pA終止序列。

3.如權利要求1或2所述的表達盒，其特征在于：所述啟動子為序列表的序列1自5’末端第33至693位核苷酸所示的CMV啟動子；所述篩選基因為序列表的序列1自5’末端第2088至5071位核苷酸所示的TKneo片段的編碼基因。

4.如權利要求3所述的表達盒，其特征在于：所述表達盒為如下(a)或(b)：

(a)序列表的序列1自5’末端第33至6451位核苷酸所示的DNA；

(b)序列表的序列1所示的DNA。

5.含有權利要求1至4中任一所述表達盒的重組表達載體。

6.如權利要求6所述的重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體為如下(c)或(d)：

(c)在重組質粒pUC19-2的Not?I和Cla?I酶切位點之間插入所述表達盒得到的重組質粒；所述重組質粒pUC19-2是將酶切識別序列乙插入重組質粒pUC19-1的EcoRI和BamH?I酶切位點之間得到的重組質粒；所述重組質粒pUC19-1是將酶切識別序列甲插入pUC19載體的BamH?I和HindIII酶切位點之間得到的重組質粒；所述酶切識別序列甲為將序列表的序列7所示的單鏈DNA和序列表的序列9所示的單鏈DNA經過變性和退火得到的雙鏈DNA；所述酶切識別序列乙為將序列表的序列10所示的單鏈DNA和序列表的序列12所示的單鏈DNA經過變性和退火得到的雙鏈DNA；

(d)在pUC19載體的多克隆位點插入所述表達盒得到的重組質粒。

7.含有權利要求5或6所述重組表達載體的轉基因細胞系。

8.權利要求5或6所述重組表達載體或權利要求7所述轉基因細胞系在表達所述IκBα蛋白的編碼基因或所述mIκBα蛋白的編碼基因中的應用。

9.一種IκBα蛋白的編碼基因或mIκBα蛋白的編碼基因的條件表達系統，包括如下(e)或(f)：

(e)權利要求5或6所述重組表達載體和輔助質粒；

(f)權利要求7所述轉基因細胞系和所述輔助質粒；

所述輔助質粒為可以表達Cre重組酶的質粒；所述Cre重組酶為如下(g)或(h)：

(g)由序列表中序列13所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(h)將序列13的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列13衍生的蛋白質；

所述IκBα蛋白如序列表的序列14所示；所述mIκBα蛋白如序列表的序列15所示。

10.如權利要求9所述的條件表達系統，其特征在于：所述IκBα蛋白的編碼基因如序列表的序列1自5’末端第741至1817位核苷酸所示；所述mIκBα蛋白的編碼基因如序列表的序列1自5’末端第5125至6201位核苷酸所示；所述(f)中，所述轉基因細胞系的宿主細胞為離體的哺乳動物細胞系，優選為細胞系PIEC；所述(e)和所述(f)中，所述輔助質粒為質粒pOG231。