[發明專利]快速檢測阪崎腸桿菌的方法

有效

• 申請號: 201110143730.3
• 申請日: 2011-05-31
• 公開（公告）號: CN102323408A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 趙渝;陳艷;黃慧心;郭魯申
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531;G01N24/08
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)向待測的樣品中加入免疫化超順磁性納米磁珠和穩定劑，30～40℃孵育45～60分鐘；

(2)將步驟(1)混合物加入核磁管中，測定自旋-自旋弛豫時間，以不含菌的樣品為空白對照，計算ΔT₂值；

所述的穩定劑為牛奶，在混合體系中質量含量為1～3％；

所述的免疫化超順磁性納米磁珠是以四氧化三鐵納米粒子為內核、以二氧化硅為外殼、表面偶聯抗阪崎腸桿菌多克隆抗體的磁性粒子。

2.權利要求1所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述的抗阪崎腸桿菌多克隆抗體為兔抗阪崎腸桿菌多克隆抗體。

3.權利要求1所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述免疫化超順磁納米磁珠的粒徑為80～120nm，用量為0.5～0.1mg/ml。

4.權利要求1所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述的免疫化超順磁性納米磁珠制備方法包括如下步驟：

(1)包被二氧化硅和表面氨基化：將粒徑10～70nm的四氧化三鐵納米磁核的環己烷溶液與正硅酸四乙酯和氨水混合，加入過硫酸銨，攪拌反應48～96小時；反應結束后加入丙酮，過濾洗滌；

(2)連接抗體：特異性抗體活化后分散在pH?7.3～7.6磷酸緩沖液中，加入步驟(1)所得表面氨基化的納米磁珠，2～8℃反應8～12小時；

所述抗阪崎腸桿菌多克隆抗體用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基丁二酰亞胺)活化。

5.權利要求4所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(1)所述四氧化三鐵納米磁核的制備方法為：在氮氣保護和真空條件下，乙酰丙酮鐵在油胺和苯醚體系中，依次在110～120℃和175～185℃保溫20～60分鐘；再升溫至300～305℃保溫1～2小時。

6.權利要求4所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(1)所述四氧化三鐵納米磁核、正硅酸四乙酯和過硫酸銨的質量比為1∶0.018～0.02∶0.003～0.004。

7.權利要求4所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(2)所述表面氨基化的納米磁珠與特異性抗體重量比為1∶0.1～0.2。

6、權利要求1所述所述快速檢測阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，用核磁共振分析儀測定自旋-自旋弛豫時間，核磁管直徑為3cm時參數設定D1(us)：100；D2(us)：200；D0(ms)：100；TD：20000；SW(kHz)：75.0；DFW(kHz)：30.0；RG：2；Ns：8；C1：2000；Ds：3。