[發明專利]丙型肝炎病毒多表位肽負荷的樹突狀細胞治療性疫苗

有效

• 申請號: 201110143410.8
• 申請日: 2011-05-31
• 公開（公告）號: CN102210861A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 賈戰生;周云;潘蕾;李端
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;G01N33/576;G01N33/569;C12N15/861;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 張培勛

技術領域

本發明涉及病毒學和免疫學技術，構建了丙型肝炎病毒多表位肽負荷的樹突狀細胞治療性疫苗。

背景技術

丙型肝炎病毒（HCV）是引起慢性肝病的主要病原體之一，全世界約有HCV感染者1.7?億-2.0億，我國人群HCV感染率約3.2%，估計全國感染者在4000?萬以上。HCV感染后，約50%?-85%轉為慢性肝炎，其中20%-30%發展為肝硬化，部分轉為肝細胞肝癌（HCC），嚴重危害人類健康，已成為全球性的、嚴峻的公共衛生問題。迄今為止，尚缺乏理想的抗病毒治療措施，干擾素治療也不令人滿意。由于HCV病毒變異率高，以保護性抗體為主的預防性HCV疫苗的研究步履維艱。因此，尋求抗HCV疫苗和有效抗病毒藥物一直是研究的熱點。

HCV基因組有9.6kb，編碼3010aa的多肽，由結構蛋白（Core、E1和E2）和7個非結構蛋白（p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）組成。HCV感染后，機體細胞模式識別受體（pattern??recognition?receptors，PRR）感受外來分子的侵入，誘導細胞內信號轉導，產生I類干擾素等固有免疫反應，以抵抗病毒的侵襲；同時通過DC介導特異性細胞免疫，清除病毒感染，恢復細胞的“健康狀態”。對急性HCV?感染病人觀察中發現，如病人能早期出現針對包膜蛋白的抗體,則有利于病毒清除。早期疫苗研究中也證明了HCV?確實具有中和抗原表位,用真核載體表達的重組膜蛋白免疫黑猩猩,可以保護動物免受同株病毒的攻擊。由于HCV中和抗原表位存在于編碼包膜糖蛋白的E區，而HCV?E區基因高度變異，尤其是E2區N端存在高變區（HRV1和HRV2），從而使機體產生的中和抗體因抗原變異而缺乏保護力，不能有效地清除病毒準種或其它型別病毒株的感染。黑猩猩感染實驗能更仔細地觀察初次感染時不同時相的免疫反應。結果說明CD4+?T細胞和CD8+?T細胞均在HCV清除和維持病毒抑制狀態中發揮重要作用。

由于HCV疫苗研究的必要性和迫切性,自1989?年HCV基因獲得克隆以來,人們一直在致力于疫苗的研究,但是進展緩慢。早些時候，人們注重發展HCV包膜糖蛋白或多肽亞單位疫苗，同HIV?疫苗的研究一樣，由于HCV包膜糖蛋白高度的變異特性，使以產生中和性抗體控制病毒感染和復制的研究遇到困難。HCV疫苗難以實現的主要原因歸納為以下三點:?①?HCV基因組變異率較高，病毒準種多，缺乏保護性抗體，不能阻止黑猩猩和人類恢復的病人再次感染，傳統的預防性疫苗的研究遇到困難；②?HCV復制能力差，感染力弱，使體內病毒滴度較低，在體外又不易培養,加之對病毒復制感染過程及發病機制的認識不夠清楚，而且HCV?編碼的不少蛋白質,如核心蛋白和NS蛋白還可能與HCV的致癌性有關,免疫原的選擇以及強度均受到一定的限制；③?缺乏理想的體外感染細胞模型,動物模型除黑猩猩外,其他動物,即使靈長類動物,如狒狒、恒河猴等都不能為HCV?所感染，限制了對疫苗評價的研究。近10年來，HCV疫苗研究的焦點主要集中在核酸疫苗、病毒載體疫苗、重組多表位疫苗以抗原遞呈細胞為載體DC疫苗等。

用帶有抗原基因的載體直接接種，可能由于機體因素在抗原未能遞呈之前被降解而喪失（或降低）免疫原性，因此，有學者在體外將抗原或抗原基因導入DC，使抗原表位與DC上的MHC結合，呈現在細胞表面作為DC細胞疫苗，然后接種，通過DC遞呈抗原信息給T、B細胞，誘導機體的細胞和體液免疫反應。研究表明，由DC激活的細胞免疫特別是CTL介導的免疫反應，在機體抵御惡性腫瘤和傳染性疾病中發揮著十分重要的作用。在DC細胞疫苗的研究中，將外源性抗原基因導入DC較常用的方法是應用重組的病毒在體外感染DC，包括逆轉錄病毒感染、腺病毒感染和痘苗病毒感染等。復制缺陷型腺病毒載體和痘苗病毒載體是最常用的兩個用作疫苗研究的病毒載體，另外還有將HCV基因嵌入HBV表面抗原基因，或與卡介苗（BCG）連接等，均在小鼠中發現能有效誘導機體的體液免疫和細胞免疫應答。

近10年來，隨著對HCV持續感染機制的認識，結合我們多年的HCV研究工作基礎，通過與國、內外學者交流，提出了HCV疫苗研究的新理念：需要結合HCV的生物學特性、感染發病特征、抗病毒免疫機制，改變“單純預防”為“預防與治療相結合”，改變“多次接種為多次反復接種”，發展能夠誘導出強大的、針對多個病毒表位的、持續較長時間的、特異性CD8+和CD4+T細胞反應的疫苗研究策略，以誘導持續免疫應答和維持病毒抑制狀態為“基本目標”的HCV疫苗研究的新理念。