[發明專利]高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株及其構建方法

無效

• 申請號: 201110141622.2
• 申請日: 2011-05-30
• 公開（公告）號: CN102226166A
• 公開（公告）日: 2011-10-26
• 發明（設計）人: 路福平;劉逸寒;張艷;王春霞;王建玲
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/56;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株，其特征在于：所述基因工程菌株含有普魯蘭酶基因，普魯蘭酶基因基因的來源是Bacillus?naganoensisATCC53909。

2.根據權利要求1所述的高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株，其特征在于：所述基因工程菌株的宿主菌是大腸桿菌BL21(DE3)。

3.根據權利要求1所述的高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株，其特征在于：所述基因工程菌株的普魯蘭酶基因由Bacillus?naganoensis?ATCC53909染色體DNA擴增得到的。

4.一種高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株的構建方法，其特征在于：方法的步驟如下：

(1)基因克隆：根據NCBI上報道的基因序列設計引物，以Bacillus?naganoensis(ATCC53909)菌株的染色體DNA為模板克隆得到普魯蘭酶基因；

(2)基因工程菌株的構建：將所獲得的普魯蘭酶基因與載體pET-22b(+)連接，酶切驗證；

(3)將酶切驗證正確的載體轉化到宿主E.coli?BL21(DE3)內，之后進行酶切，測序驗證，確定構建含有普魯蘭酶基因的基因工程菌株BL21(DE3)/pET22b-pul。

5.根據權利要求4所述的高效表達普魯蘭酶的基因工程菌株的構建方法，其特征在于：基因工程菌株BL21(DE3)/pET22b-pul經發酵所測粗酶液酶活力為10.94U/mg，比出發菌株Bacillus?naganoensis?ATCC53909酶活力提高了37倍。