[發(fā)明專利]一種篩選PknB抑制劑的反應(yīng)體系及其篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110138454.1
• 申請日: 2011-05-25
• 公開（公告）號: CN102796807A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余利巖;黃彬;趙莉莉;蘇靜;李秋萍;魏玉珍;張玉琴
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;C12Q1/48;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

1.一種用于篩選PknB抑制劑的反應(yīng)體系，其特征在于，含有如下濃度的反應(yīng)物：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的反應(yīng)體系，其特征在于，含有如下濃度的反應(yīng)物：

3.一種篩選PknB抑制劑的方法，包括如下步驟：

(1)配置如下反應(yīng)體系：

(2)設(shè)置如下各反應(yīng)組：

i)樣品實驗組：取步驟(1)所述的反應(yīng)體系，加入1μL濃度為1mg/mL～10mg/mL的樣品溶液；

ii)陰性實驗組：取步驟(1)所述的反應(yīng)體系，加入1μL?DMSO；

iii)陽性對照組：取步驟(1)所述的反應(yīng)體系，加入終濃度為60μg/ml的星形孢菌素；

(3)制備熒光素酶反應(yīng)液

取Kinase?緩沖液在37℃下溶解，與Kinase底物充分混合，形成綠色澄清的溶液，即熒光素酶反應(yīng)液；

(4)篩選

將步驟(1)的各反應(yīng)組在酶標(biāo)儀中分別反應(yīng)180min后，加入步驟(3)配制的所述熒光素酶反應(yīng)液，測定各反應(yīng)組熒光值，計算反應(yīng)抑制率，對反應(yīng)具有抑制作用的即為陽性樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系為：

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，其中步驟(2)中樣品為化合物時，向50μL反應(yīng)體系中加入1μL的1mg/mL的樣品溶液作為樣品實驗組。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，其中步驟(4)為將步驟(2)中各反應(yīng)組分別混勻后加入同一塊96孔板中，置于酶標(biāo)儀內(nèi)，開啟溫控為37℃進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)180min后取出，每孔均加入50μL熒光素酶反應(yīng)液，置于酶標(biāo)儀中測定每孔熒光值，每孔測定持續(xù)時間1s，測定次數(shù)1次；按以下公式計算各孔的抑制率：

其中：ΔF_N是陰性對照孔熒光值，ΔF_P是陽性對照孔熒光值，ΔF_S是樣品實驗孔熒光值。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，抑制率大于30％的樣品為陽性樣品。