[發明專利]一種溶栓蛋白酶基因NKS1及用途

無效

• 申請號: 201110135907.5
• 申請日: 2011-05-25
• 公開（公告）號: CN102337282A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 王沁;夏濤
• 申請（專利權）人: 王沁;夏濤
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N15/63;C12N15/10;C12Q1/68;G06F19/22;A61K38/48;A61K48/00;A61P7/02
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

1.一種溶栓蛋白酶基因NKS1，其特征在于：其編碼由序列表中SEQ?ID?NO:1中所表示的氨基酸序列或者與SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列同源性在70%以上的基因。

2.如權利要求1所述的溶栓蛋白酶基因NKS1，其特征在于：所述基因包含序列表中SEQ?ID?NO:2中所示的核苷酸序列或者與SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列同源性在70%以上的基因。

3.一種核酸構建體或攜有所述核酸構建體的載體，其特征在于：含編碼如權利要求1或2所述蛋白質的基因或者基因片段構建得到的核酸構建體或所述核酸構建體的載體。

4.一種利用如編碼權利要求1所述蛋白質的基因產生溶栓蛋白酶基因NKS1的方法，該方法包括以下步驟：

納豆激酶基因NKS1的克隆：采用PCR擴增法、重組法或人工合成法方法來獲得納豆激酶基因NKS1核苷酸全長序列或其片段；

納豆激酶基因NKS1的DNA?改組：用于DNA改組的底物為生物體不同個體、株系或種類的納豆激酶基因制取的不同突變形式的納豆激酶基因；表達改組文庫的構建：將含有重組納豆激酶基因片段的重組基因庫轉入到一種細胞或生物體內進行篩選；高活性納豆激酶基因的篩選：篩選到的活性顯著提高的細菌、酵母、枯草桿菌突變株中提取質粒，從而獲得了一個活性非常高的新的納豆激酶基因。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述納豆激酶基因進行DNA改組的主要步驟為：首先用DNase?I或限制酶對納豆激酶基因進行隨機片段化，回收其中的小片段即重疊片段；然后在不加引物的情況下，用DNA?聚合酶進行Primerless?PCR使小片段互為引物和模板進行擴增，從而使不同的突變得到廣泛的重組；最后經Primer?PCR擴增得到含有重組納豆激酶基因片段的重組基因庫。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述表達改組文庫的構建步驟中，所述細胞或生物體包括細菌、酵母、枯草桿菌或植物細胞。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法還包括以下步驟，高活性納豆激酶新基因NKS1的序列分析：通過測序來獲取所述新的納豆激酶基因的核苷酸序列，運用生物軟件對活性顯著提高的所述新的納豆激酶基因和野生型納豆激酶基因進行核苷酸序列比對、氨基酸序列比對生物信息學分析。

8.如權利要求1至3任一所述的溶栓蛋白酶基因NKS1，其特征在于：所述的溶栓蛋白酶基因NKS1在制備溶栓藥物中的應用。