[發(fā)明專利]用于檢測CLCN1基因突變的方法、試劑盒及特異性引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110129334.5
• 申請日: 2011-05-19
• 公開（公告）號: CN102154509A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏曉明;王金明
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳華大基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于檢測CLCN1基因突變的方法、試劑盒及特異性引物。具體而言，本發(fā)明涉及用于檢測CLCN1基因的編碼區(qū)及內(nèi)含子剪切位點突變的方法、試劑盒及特異性引物。

背景技術(shù)

真核生物基因由編碼蛋白質(zhì)的外顯子(exon)和不編碼蛋白質(zhì)的間插序列內(nèi)含子(intron)組成。外顯子是真核生物基因的一部分，它在剪接后仍會被保存下來，并可在蛋白質(zhì)生物合成過程中被表達為蛋白質(zhì)。外顯子是最后出現(xiàn)在成熟RNA中的基因序列，又稱表達序列，是既存在于最初的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。

通過PCR方法對基因組DNA進行擴增，將得到的目的片段進行測序，并與正常序列進行對比，可以獲得基因突變的信息。在分子生物學(xué)研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎(chǔ)。Sanger于1977年建立了雙脫氧核糖核酸鏈末端終止法測序。Sanger高通量測序可以半小時完成96個樣本的測序，隨著測序成本的降低，這種方法越來越適合做大規(guī)模檢測，既省時又高效。

氯離子通道基因CLCN1(Chloride?Channel?1)的核苷酸序列是已知的(Genbank?Accession?No.NG_009815.1)。根據(jù)HGMD等數(shù)據(jù)庫提供的信息，CLCN1的突變主要分布在外顯子及剪切位點側(cè)翼區(qū)，包括100余個點突變。詳細目錄見表1。

表1CLCN1突變位點

??1097_1098delTG ??1183_1187del5 ??1278_1281delTTTG ??1437_1450del14 ??2264delC ??2329delG ??2518_2519delCT ??1259_1260insC ??2513_2514insCTCA ??599_600insG ??830_831insG ??898_899delinsTA ??IVS1+3A-T ??IVS13+1G-A ??IVS17+1G-T ??IVS18+5C-T ??IVS19+2T-A ??IVS22-1G-A ??IVS5+1G-A ??IVS5+2T-A ??IVS8+1G-A ??R338Q ??R377X ??T398I ??A402V ??P408A ??Q412P ??F413C ??A415V ??I424M ??F428S ??Q445X ??S471F ??P480T ??P480H ??P480L ??C481X ??G482R ??M485V ??R496S ??G499R ??A531V ??T550M ??I556N ??V563I ??A566T ??P575S ??T631I ??Q658X ??A659V ??E67X ??R669C ??Q68X ??F708L ??E717X ??K752R ??Q74X ??Q807X ??G859D ??P883T ??R894X ??P932L ??R105C ??M128V ??S132C ??D136G ??Y150C ??F161V ??V165G ??F167L ??E193K ??L198V ??G200R ??A218T ??G230E ??V236L ??C242X ??Y261C ??T268M ??C271R ??G276D ??L283F ??V286A ??F288S ??S289N ??E291K ??V299L ??R300Q ??W303R ??F306L ??F307S ??T310M ??A313T ??A313V ??R317X ??R317Q ??R317L ??A320V ??V321L ??I329T ??A331T ??D644G ??D265L ??2655_2656insC ?