[發明專利]用于檢測CLCN1基因突變的方法、試劑盒及特異性引物

有效

• 申請號: 201110129334.5
• 申請日: 2011-05-19
• 公開（公告）號: CN102154509A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 魏曉明;王金明
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種檢測CLCN1基因的編碼區及內含子剪切位點突變的方法，其包括以下步驟：

(1)使用特異性擴增引物對通過PCR擴增待測樣本的CLCN1基因，從而獲得PCR擴增產物；

(2)采用所述特異性擴增引物對中的正向引物將步驟(1)中的擴增產物進行測序擴增，從而獲得測序擴增產物；

(3)對步驟(2)中獲得的測序擴增產物進行測序，并將測序峰圖與數據庫中的CLCN1基因參考序列進行對比，從而確定基因的突變位點。

2.權利要求1的方法，其中在步驟(1)和步驟(2)之間包括純化PCR擴增產物的步驟，優選地，所述純化方法為通過凝膠電泳和millipore純化板進行純化。

3.權利要求1的方法，其中在步驟(2)和步驟(3)之間還包括純化所述測序擴增產物的步驟，優選地，所述純化方法為通過EDTA和無水乙醇進行純化。

4.權利要求1-3任一項的方法，其中在所述步驟(3)中測序方法為Sanger法或第二代測序法。

5.權利要求1-3任一項的方法，其中所述PCR擴增引物對的核苷酸序列是SEQ?ID?NO：1和16、SEQ?ID?NO：2和17、SEQ?ID?NO：3和18、SEQ?ID?NO：4和19、SEQ?ID?NO：5和20、SEQ?ID?NO：6和21、SEQ?ID?NO：7和22、SEQ?ID?NO：8和23、SEQ?ID?NO：9和24、SEQ?IDNO：10和25、SEQ?ID?NO：11和26、SEQ?ID?NO：12和27、SEQ?ID?NO：13和28、SEQ?ID?NO：14和29、SEQ?ID?NO：15和30中的一對或多對，并且/或者所述測序擴增引物的核苷酸序列是SEQ?ID?NO：1-15中的一個或多個。

6.權利要求1-3任一項的方法，其中所述樣品是血樣，優選是分離自哺乳動物，特別是人的血樣。

7.用于擴增CLCN1基因的特異性引物，其序列是SEQ?ID?NO：1-30中的任選一項。

8.權利要求7的特異性引物用于檢測CLCN1基因突變位點的用途。

9.用于檢測CLCN1基因突變位點的試劑盒，其包含用于擴增CLCN1基因的擴增引物，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1和16、SEQ?IDNO：2和17、SEQ?ID?NO：3和18、SEQ?ID?NO：4和19、SEQ?ID?NO：5和20、SEQ?ID?NO：6和21、SEQ?ID?NO：7和22、SEQ?ID?NO：8和23、SEQ?ID?NO：9和24、SEQ?ID?NO：10和25、SEQ?ID?NO：11和26、SEQID?NO：12和27、SEQ?ID?NO：13和28、SEQ?ID?NO：14和29、SEQ?IDNO：15和30中的一對或多對；和/或用于測序擴增的引物，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1-15中的一個或多個，任選地，所述試劑盒還包括用于PCR擴增反應的酶和試劑，和/或用于測序擴增反應的酶和試劑，和/或用于提取血液DNA的試劑。

10.權利要求9的試劑盒用于檢測CLCN1基因突變的用途。