[發明專利]一種基于表面增強拉曼光譜技術的尿酸定量檢測方法

無效

• 申請號: 201110129164.0
• 申請日: 2011-05-18
• 公開（公告）號: CN102288592A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 馮尚源;陳榮;林多;林居強;李永增;黃祖芳;陳燕坪;俞允;席剛琴
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;吳欽緣

技術領域

本發明涉及尿酸的定量檢測方法，具體是指利用表面增強拉曼光譜（簡稱SERS）定量檢測尿酸濃度的方法，屬于藥品、毒品檢測技術領域。

背景技術

表面增強拉曼散射是Fleischmann等人在1974年進行電化學實驗，研究吸附在粗糙銀電極表面上的吡啶分子拉曼散射實驗時首次發現的。表面增強拉曼散射效應是指當目標分子吸附在一些粗糙的貴金屬良導體表面或溶膠中時，其拉曼散射信號較常規拉曼光譜信號獲得巨大增強的現象。表面增強拉曼光譜（SERS）技術由于其具有極高檢測靈敏度、可猝滅熒光、非破壞性指紋式的分辨能力等許多優點被廣泛應用于表面研究、生物大分子的界面取向及構型、構象分析、痕量與微量檢測，甚至可以進行單分子檢測。尿酸是人體外源性（飲食）及內源性嘌呤代謝的最終產物。當血中尿酸超過7mg/dl時，尿酸就開始以結晶形式析出并在一些組織內沉積可導致腎結石和痛風。當血尿酸大于或等于7mg/dl時可以診斷為高尿酸血癥。相關研究表明，近些年來與高尿酸血癥有密切關系的疾病發病率明顯呈上升趨勢，并且發病年齡提前，越來越受到人們關注。因此，尋求一種無損、高靈敏度的檢測方法對人體內尿酸進行監測，對于廣大的科學家、臨床醫學工作者以及廣大患者而言具有十分重要的應用價值。在本發明專利中，我們公布了一種新穎、便捷的表面增強拉曼光譜技術定量檢測尿酸的方法。

利用表面增強拉曼光譜技術定量檢測尿酸，國內外尚未見相關報道，該領域目前尚是空白。

發明內容

本發明的目的是提供一種以銀納米粒子為增強基底的表面增強拉曼光譜定量檢測尿酸的方法。首先建立已知尿酸濃度的表面增強拉曼光譜強度-濃度標準對照工作曲線圖，將待檢測的含有尿酸的介質樣品，用表面增強拉曼光譜檢測，得到含有尿酸的待檢樣品SERS譜圖，將該譜圖與標準工作曲線圖進行對照，從譜線相對強度可以直接計算出尿酸的濃度，從而實現尿酸的定量檢測，并且檢測極限達到1mg/L，為尿酸定量檢測提供一種直接、快速、準確的新方法。

為實現本發明目的采用的技術方案是：

1、SERS活性基底-銀膠的制備

把適量0.1M/L的?NaOH溶液加入到6×10^-2M/L的鹽酸羥胺溶液中，然后將混合物快速添加到1.11×10^-3M/L的?AgNO₃溶液中，快速攪拌10分鐘得到均勻的乳灰色銀膠溶液。

將適量銀膠溶液放在離心管中以10000r/min離心10分鐘，取下層高濃度銀膠備用。

上述步驟中，NaOH：鹽酸羥胺：AgNO₃的體積比為1：1-1.3：18-25。

2、建立尿酸SERS光譜譜線相對強度-濃度標準對照工作曲線圖

準確稱取一定量尿酸，用11.6mmol/L的Na₂CO₃溶液在70⁰C水浴中溶解并用超純水定容，再將此溶液稀釋，分別配制成濃度為5～6個梯度濃度的尿酸標準溶液樣品。梯度濃度的設定，可說明隨著尿酸濃度的增加，其SERS光譜信號逐漸增強。5～6個梯度濃度中，其梯度變化值在20mg/L～140mg/L之間。

將5～6個梯度濃度的尿酸標準溶液分別與等體積的步驟（1）制備的高濃度銀膠均勻混合后滴加在高純度的鋁片上，并在其上分別滴加10μL?K₂SO₄溶液，靜置1分鐘后進行SERS光譜測試。

取步驟（1）制備的高濃度銀膠單獨進行拉曼光譜測試，得到銀膠本底拉曼光譜譜圖。

用銀膠本底拉曼光譜240cm^-1處的譜峰作為內標，對檢測獲得不同濃度的尿酸標準溶液SERS光譜進行譜峰強度歸一化，利用尿酸SERS光譜在636cm^-1波數處SERS譜峰相對強度與尿酸濃度成線性關系，建立尿酸SERS光譜譜線相對強度-濃度標準工作曲線圖。

3、推斷未知尿酸濃度

將未知濃度的尿酸溶液與步驟（1）制備的高濃度銀膠均勻混合并添加適量K₂SO₄溶液，靜置1分鐘后進行未知濃度的尿酸溶液SERS光譜測試，并對檢測獲得的未知濃度的尿酸SERS光譜進行譜峰強度歸一化處理。

把檢測得到并經強度歸一化處理的未知濃度尿酸溶液SERS譜圖與尿酸SERS光譜相對強度-濃度標準工作曲線進行對照，從譜線相對強度可以直接推斷出尿酸的濃度。