[發明專利]用于檢測豬瘟病毒野毒株的引物對、探針、以及試劑盒

有效

• 申請號: 201110124916.4
• 申請日: 2011-05-16
• 公開（公告）號: CN102212617A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 孫明;陳西釗;陳南華;喬明明;陳曦;田克恭
• 申請（專利權）人: 北京世紀元亨動物防疫技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 程泳

1.一種引物對，其中一條引物包含SEQ?ID?NO：5所示的核苷酸序列，另一條引物包含SEQ?ID?NO：10所示的核苷酸序列。

2.一種探針，其包含SEQ?ID?NO：16所示的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的探針，其為自身淬滅探針，例如其5’端標記有熒光發射基團，3’端標記有熒光淬滅基團。

4.根據權利要求3所述的探針，其中，所述熒光發射基團選自FAM、VIC、JOE、和HEX；所述熒光淬滅具體選自TAMRA、BHQ、和MGB。

5.一種組合物，其含有權利要求1所述的引物對和/或者權利要求2-4中任一項所述的探針。

6.一種試劑盒，其包含權利要求1所述的引物對和權利要求2-4中任一項所述的探針。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其還包含RT-PCR反應緩沖液、反轉錄酶和Taq酶；具體地，所述反轉錄酶為高效反轉錄酶，所述Taq酶為熱啟動Taq酶。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其中，所述引物對溶于RT-PCR反應緩沖液，其濃度為10pmoL/μL。

9.根據權利要求6所述的試劑盒，其還包含RNA提取試劑。

10.根據權利要求6所述的試劑盒，其還包含陽性對照和陰性對照，其中，所述陽性對照為豬瘟石門標準毒株，經過滅活后得到；所述陰性對照為豬瘟疫苗株，經滅活后得到。

11.一種檢測豬瘟病毒野毒株的方法，包括使用權利要求1所述的引物對、權利要求2-4中任一項所述的探針、權利要求5所述的組合物、或者權利要求6-10中任一項所述的試劑盒的步驟。

12.根據權利要求11所述的方法，包括下述步驟：

1)病毒RNA的提取；

2)進行FQ-PCR反應：設被檢樣品RNA、陰性對照和陽性對照總體積為N，則反應體系配制如下：

在熒光PCR儀上進行以下反應：42℃5min，95℃10s；95℃5s，60℃35s，在每個循環第二步即60℃35s收集熒光信號，共40個循環；

3)判斷待檢樣品：

陽性對照Ct值≤30并出現特定的擴增曲線，陰性對照無Ct值并且無特定擴增曲線，實驗結果成立；

無特異性擴增曲線為陰性結果；

有特異性擴增曲線的情況下，樣本Ct值≤30判斷為陽性，樣本Ct值滿足30＜Ct＜37時需要進行重復試驗，重復試驗結果若Ct＜37判定樣品為陽性，否則為陰性。

13.權利要求1所述的引物對、權利要求2-4中任一項所述的探針、權利要求5所述的組合物、或者權利要求6-10中任一項所述的試劑盒在制備檢測測豬瘟病毒野毒株的試劑中的用途。