[發(fā)明專利]一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110124912.6
• 申請日: 2011-05-16
• 公開（公告）號: CN102241791A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發(fā)明（設計）人: 夏海鋒;金雄華;吳璞強;饒志明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C08B37/12
• 分類號: C08B37/12;B01J20/291;B01D15/38
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1.一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法，其特征在于：采用烯丙基縮水甘油醚活化瓊脂凝膠上的羥基，加成巰基乙酸后，偶聯(lián)N-羥基丁二酰亞胺，得到一種連接臂長度為10個原子、具有對氨基高度特異性的瓊脂糖凝膠。

2.按照權利要求1所述的一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法，其特征在于烯丙基縮水甘油醚的活化密度可控制在20-400μmol/mL，N-羥基丁二酰亞胺修飾密度可控制在20-150μmol/mL。

3.按照權利要求1所述的一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法，其特征在于所用的瓊脂糖凝為市售進口或國產(chǎn)瓊脂糖凝膠，型號為4FF和6FF，粒徑范圍30-150μm。

4.按照權利要求1所述的一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法，其特征在于其方法的步驟如下：

1)烯丙基縮水甘油醚活化

將10mL瓊脂糖凝膠水洗抽干，于砂芯漏斗中依次用5倍體積30％、70％丙酮洗滌，最后用5倍體積的100％二氧六環(huán)洗滌5次、抽干，轉移到100ml具塞三角瓶中，加入10mL二氧六環(huán)、0.05-2mL烯丙基縮水甘油醚和50-300μL的三氟化硼乙醚，35℃下140rpm水浴搖床中反應45min，反應后的基質依次用5倍體積30％、70％丙酮洗滌，最后用大量去離子水洗滌干凈；

2)雙鍵加成巰基乙酸

取10mL活化基質，加入1.20mL巰基乙酸、10mL去離子水、0.25g過硫酸銨，60℃下反應8h；

3)N-羥基丁二酰亞胺基團的偶聯(lián)

取10mL巰基乙酸羧化后的瓊脂糖凝膠，分別用30％、70％和100％的丙酮溶液清洗，再用100％二氧六環(huán)清洗5次；將二氧六環(huán)替換后的瓊脂糖凝膠轉移到100mL帶塞三角瓶中，加入10mL二氧六環(huán)、0.2-1g?N-羥基丁二酰亞胺、0.2-1g多肽縮合試劑，25℃振蕩8-12h；最后用大量二氧六環(huán)、甲醇、丙酮清洗介質，于異丙醇溶液中避光貯存?zhèn)溆谩?/p>

5.按照權利要求4所述的一種瓊脂糖凝膠的N-羥基丁二酰亞胺修飾方法，其特征在于所用的多肽試劑為N，N，-二環(huán)己基碳二亞胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺。