[發明專利]胰高血糖素樣肽-1突變體多肽及其制備方法和其應用

有效

• 申請號: 201110115152.2
• 申請日: 2011-05-05
• 公開（公告）號: CN102766204A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 付剛;龔珉;徐為人;王玉麗;湯立達;任曉文
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K19/00;A61K38/26;A61P3/10;A61P3/04
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

技術領域

本發明涉及糖尿病相關的藥物領域，具體而言，本發明涉及一種新型胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)突變體多肽，該多肽具有延長的GLP-1的體內半衰期。本發明還涉及該多肽的制備方法及其應用。

背景技術

糖尿病是一種遺傳因素和多種環境因素相關聯的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂綜合癥。由于糖尿病還伴隨著諸多并發癥，現已成為僅次于惡性腫瘤和心血管疾病之后的第三大健康殺手。1984年，胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like?peptide-1，GLP-1)被發現，它是一種具有30個氨基酸的腸降血糖素，具有促進胰島素分泌和生物合成，抑制胰高血糖素的分泌，促進胰島細胞增殖，抑制胰島細胞凋亡，保存細胞對血糖的敏感性等多種生理功能。GLP-1與其受體結合后能夠增加細胞內cAMP濃度并激活蛋白激酶A(PKA)，通過cAMP/PKA激酶通路增強細胞內胰島素基因的轉錄和翻譯，并提高對葡萄糖刺激信號的敏感性，從而增加胰島素分泌量。GLP-1還通過與細胞上的胰高血糖素樣肽-1受體(GLP-1R)作用抑制胰高血糖素的分泌，或者間接通過促進胰島素和生長抑素的分泌來抑制胰高血糖素的分泌。GLP-1作為降血糖藥物受到限制的主要原因是GLP-1在體內能夠迅速的被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)所降解而失去活性。

腸促胰島素類似物(Exendin-4)是一條39個氨基酸組成的直鏈多肽，最初由南美巨蜥的唾液分離獲得。它與人源GLP-1序列有53％的同源性。Exendin-4同樣能夠和GLP-1受體結合，產生促進胰島素分泌等生理作用，且Exendin-4的N端第二個氨基酸為甘氨酸，能夠耐受血漿中DPP-IV的分解，故Exendin-4被吸收入血后的半衰期較長(t1/2＝2.4小時)；C端比GLP-1多9個氨基酸，結構上形成了“色氨酸籠”(“Trp-cage”)，能夠和GLP-1受體更緊密的結合。

由于GLP-1為人源多肽，沒有Exendin-4的免疫源性問題，根據其設計的GLP-1類似物在臨床試驗中副作用較為輕微，已成為設計用于治療2型糖尿病的GLP-1受體激動劑的理想原型，開發潛力巨大。2010年，諾和諾德公司以GLP-1為原型設計的Liraglutide(中文名利拉魯肽，商品名)在美國上市，因其良好的臨床效果、較低的副作用以及更好的患者依從度(一天注射一次)贏得了廣泛關注，從而掀起了GLP-1受體激動劑的開發熱潮。

雖然現在上市的Liraglutide等GLP-1受體激動劑延長了半衰期，但仍需患者每天注射藥物，在藥物使用舒適度上仍有改進空間。因此有必要進一步提高GLP-1類多肽藥物的體內半衰期，提高患者依從度。

發明內容

因此，本發明的目的是針對臨床上GLP-1類似物在體內存留時間較短，需要每天注射給藥的缺限，提供一種半衰期較長的GLP-1突變體多肽，該GLP-1突變體多肽半衰期較長，不需要每天給患者注射，能夠有效地提高患者的依從態度。

本發明的另一個目的是提供上述多肽的制備方法，此外，還提供上述多肽在制備治療糖尿病和肥胖癥的藥物中的應用。

本發明的又一個目的是提供一種以GLP-1突變體多肽作為有效成分的藥物組合物。

用于實現上述目的的技術方案如下：

一方面，本發明提供一種胰高血糖素樣肽-1突變體多肽，所述突變體多肽是在如下所示的SEQ?ID?NO?1序列基礎上突變產生的：

⁷HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG³⁶

其中，上述序列氨基酸殘基第9位Asp、16位Gly和/或27位Val發生點突變為Cys，并在C末端添加Cys。

如上所述的胰高血糖素樣肽-1突變體多肽，在第16位Gly和/或第27位Val發生點突變；優選地，在第27位Val發生點突變。

如上所述的胰高血糖素樣肽-1突變體多肽，優選選自：

SEQ?ID?NO?2：⁷HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGC³⁷；

SEQ?ID?NO?3：⁷HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGC³⁷；和

SEQ?ID?NO4：⁷HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLCKGRGC³⁷。