[發(fā)明專利]N7-鳥嘌呤烷化物的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110114010.4
• 申請(qǐng)日: 2011-05-04
• 公開（公告）號(hào): CN102276610A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙麗嬌;許潔;宋秀慶;白寶清;鐘儒剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D473/18
• 分類號(hào): C07D473/18
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 張燕慧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一類DNA堿基修飾物的制備方法，具體涉及N⁷-鳥嘌呤烷化物的制備方法。

背景技術(shù)

堿基修飾是DNA損傷的一種重要形式。外源化學(xué)致癌物或者藥物進(jìn)入生物體內(nèi)后，與細(xì)胞內(nèi)的DNA發(fā)生作用生成各種不同結(jié)構(gòu)的堿基修飾產(chǎn)物，造成DNA分子結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性的變化，進(jìn)而可能導(dǎo)致DNA斷鏈、交聯(lián)、堿基錯(cuò)誤配對(duì)等損傷。堿基的烷化修飾是DNA在親電試劑作用下生成的一種常見損傷產(chǎn)物，一些致癌物就是通過導(dǎo)致DNA堿基的烷化修飾而誘發(fā)癌癥的。堿基烷化產(chǎn)物一般都形成于堿基的親核部位，其中鳥嘌呤的N⁷位是親核位點(diǎn)中最活潑的。N⁷-鳥嘌呤烷化物是一類極為重要的DNA損傷產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，其中R表示-CH₂CH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH＝CH₂或-CH₂CH₂Br。

N⁷-鳥嘌呤烷化物是致癌或者抗癌過程中的重要分子標(biāo)記物，其在動(dòng)物體內(nèi)的生成機(jī)理、分析檢測(cè)方法和體外制備方法是化學(xué)、藥學(xué)和毒理學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。比如，亞硝胺是一類重要的致癌物質(zhì)，研究表明其在細(xì)胞色素P450作用下代謝活化生成α-羥基亞硝胺，然后經(jīng)分解生成活潑親電試劑烷基重氮鹽離子，進(jìn)而導(dǎo)致鳥嘌呤的烷化損傷。煙草特異亞硝胺4-(N-亞硝基甲氨基)-1-3-(吡啶基)-1-丁酮(NNK)是一種強(qiáng)致癌物，能夠?qū)е路伟琀echt(S.S.Hecht，Chem.Res.Toxicol.，1998，11：559～603)的研究表明NNK致癌的作用與導(dǎo)致DNA生成N⁷-鳥嘌呤烷化物有關(guān)。Mathison等(B.H.Mathison，et?al.Toxicol.Appl.Pharm.，1994，127(1)：91～98)將異煙肼、肼苯噠嗪和甲醛分別與小牛胸腺DNA反應(yīng)，在反應(yīng)混合液中均發(fā)現(xiàn)了N⁷-甲基鳥嘌呤的生成。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，肼類化合物在體內(nèi)經(jīng)甲酰化后生成腙進(jìn)而分解生成甲基化中間體與DNA作用生成N⁷-甲基鳥嘌呤和O⁶-甲基鳥嘌呤。烯烴類化合物在P450的作用下代謝成相應(yīng)的環(huán)氧烷，進(jìn)而與DNA反應(yīng)生成N⁷-鳥嘌呤烷化物。一些藥物也能夠?qū)е翫NA堿基的烷化修飾，比如臨床上用于治療淋巴瘤的氮芥和用于治療腦瘤的亞硝基脲，均能夠?qū)е馒B嘌呤烷化進(jìn)而引起DNA交聯(lián)。Osborne等(M.R.Osborne，et?al.Chem.Res.Toxicol.，1995，8：316～320)研究表明，N，N-2-氯乙基甲胺可誘導(dǎo)大馬哈魚睪丸DNA生成兩種N⁷-鳥嘌呤烷化物和以其為中間體的兩種交聯(lián)物。Bodell(W.J.Bodell，J.Neuro-oncology，2009，91(3)：257～264)報(bào)道氯乙基亞硝基脲和DNA反應(yīng)能生成13種DNA損傷產(chǎn)物，其中包括堿基烷化修飾物N⁷-(2-羥乙基)鳥嘌呤和N⁷-(2-氯乙基)鳥嘌呤，并且這兩種烷化物的含量明顯高于其它烷化產(chǎn)物，說明鳥嘌呤N⁷位最容易受到烷基重氮鹽離子的進(jìn)攻。

現(xiàn)有文獻(xiàn)中報(bào)道的DNA堿基烷化修飾物的制備方法包括以下兩個(gè)步驟：1、以DNA核苷為原料，加入過量的烷化劑，以二甲基甲酰胺為溶劑，加熱反應(yīng)，經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析分離純化，向分離出的溶液中加入濃氨水，即有沉淀物析出，然后過濾沉淀物。2、酸解沉淀物，進(jìn)行脫糖反應(yīng)，經(jīng)高效液相色譜分離得到目標(biāo)化合物。該方法存在的問題如下：

(1)所用溶劑對(duì)核苷的溶解性不好，易造成反應(yīng)不完全，影響產(chǎn)率；

(2)制備過程中需要經(jīng)過葡聚糖凝膠柱層析和高效液相色譜兩次分離純化，產(chǎn)物損失較多，產(chǎn)率低，分離過程復(fù)雜；

(3)洗脫液用量大，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重；

(4)使用葡聚糖凝膠柱層析和高效液相色譜成本高、產(chǎn)品純化量少，不利于大量生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了一種簡(jiǎn)單方便、原料易得、收率高的N⁷-鳥嘌呤烷化物的制備方法，主要解決了現(xiàn)有制備方法存在的制備過程繁瑣、分離純化復(fù)雜、產(chǎn)率低、適用性不廣等技術(shù)問題。