[發明專利]一種石斑魚虹彩病毒保護性抗原的篩選方法

無效

• 申請號: 201110110400.4
• 申請日: 2011-04-29
• 公開（公告）號: CN102277361A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 歐陽征亮;秦啟偉;汪沛然;黃曉紅
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/10;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種石斑魚虹彩病毒保護性抗原基因，其特征在于基因的核苷酸序列如SEQ?ID：No1或2或3所示。

2.一種如權利要求1所述抗原基因的篩選方法，其特征在于包括以下步驟：①在石斑魚虹彩病毒編碼基因中排除假的開放閱讀框及定位于胞質和胞核中的蛋白和小于140個氨基酸的蛋白后，通過同源性分析、蛋白質保守結構域分析及信號肽與跨膜區分析，篩選跨膜蛋白和分泌蛋白，得到疫苗候選基因；②將篩選出的疫苗候選基因PCR擴增全長，構建各個基因的DNA疫苗；③使用DNA疫苗免疫石斑魚幼魚，篩選出能產生明顯免疫保護作用的抗原。

3.一種如權利要求1所述的石斑魚虹彩病毒保護性DNA疫苗，其特征在于由以下方法獲得：以SEQ?ID：No1或2或3為模板進行PCR擴增，擴增產物連接到pcDNA?3.1載體獲得重組質粒，轉染大腸桿菌DH5α后，培養12~16小時，提取質粒DNA獲得所述的DNA疫苗。

4.如權利要求3所述的DNA疫苗的應用方法，其特征在于將DNA疫苗進行肌肉注射注入石斑魚體內。

5.如權利要求4所述的DNA疫苗的應用方法，其特征在于所述的每次注射DNA疫苗50-100μL，所含質粒DNA為30-50μg。