[發明專利]BK通道阻斷劑基因、其重組載體及其克隆方法

無效

• 申請號: 201110107768.5
• 申請日: 2011-04-28
• 公開（公告）號: CN102242125A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 吉永華;沈昊;周智磊;董邦乾;嚴麗
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/10;C12N15/66
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種BK通道阻斷劑基因，其特征在于該基因為SEQ?ID?NO：1?所示的堿基序列。

2.一種根據權利要求1所述的BK通道阻斷劑基因的重組載體基因，其特征在于該重組載體基因為SEQ?ID?NO：2?所示的堿基序列。

3.一種宿主細胞，其特征在于該宿主細胞含有權利要求2所述的重組載體。

4.一種克隆根據權利要求1所述的BK通道阻斷劑基因的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：使用5’-?ATTGAAGCTTACGCGTCGACTATA（dT）-3’引物逆轉錄野生東亞鉗蝎總RNA，獲得BK通道阻斷劑基因。

5.一種克隆根據權利要求2所述的重組載體的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.將BK通道阻斷劑基因作為克隆模板，根據pGEX-4T-3的多克隆位點序列，選擇BamHⅠ和SmaⅠ兩個限制性酶的識別位點做連接位點，設計正向引物和反向引物，再經過PCR反應，將PCR產物及載體pGEX-4T-3進行BamHⅠ和SmaⅠ雙酶切，酶切后通過T₄DNA連接酶連接構建BK通道阻斷劑基因的重組載體序列；

所述的正向引物為：5’-?TTCGGATCCTTTGGACTCATAGA-3’?；

所述的反向引物為：5’-?CTTCCCGGGTTAATCAGTAGCAT-3’；

b.?將步驟a所得重組載體序列經過Sepharose?4B-GSH親和層析柱純化，GSH洗脫液洗脫得到一條30KD的蛋白條帶，即為BK通道阻斷劑基因的重組載體。