[發明專利]一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法

無效

• 申請號: 201110107765.1
• 申請日: 2011-04-28
• 公開（公告）號: CN102759605A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 劉志楠;喻東威;趙源;劉曉川;薛志清;杜麗;李梅;劉衛星
• 申請（專利權）人: 內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司
• 主分類號: G01N33/04
• 分類號: G01N33/04;G01N33/569
• 代理公司: 北京漢德知識產權代理事務所(普通合伙) 11328
• 代理人: 莊一方

技術領域

本發明涉及一種煙酸和煙酰胺的檢測方法，尤其涉及一種用于牛奶和奶粉制品中煙酸和煙酰胺的檢測方法。

背景技術

目前，國內外關于煙酸和煙酰胺的檢測方法都比較復雜，一般有微生物法、高效液相法和酶聯免疫法。酶聯免疫法檢測結果與實際數值出入較大，高效液相法檢測的下限較微生物法要高出很多。

微生物法檢測乳品中煙酸和煙酰胺是利用植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)，ATCC?8014對煙酸和煙酰胺的特異性，在含有煙酸和煙酰胺樣品中生長產生的酸度和形成的光密度來測定煙酸和煙酰胺的含量。現有的微生物法檢測煙酸和煙酰胺需要經過制備測試菌液、加入緩沖液和水水解，加入鹽酸調整pH值進行樣品前處理、制作標準曲線、滅菌、接種、培養、使用風光光度計測定。但是檢測過程復雜，使用分光管妒忌需將每個樣品放入比色皿，操作繁瑣；容易造成交叉污染，結果重現性不好。基于上述問題，開發一種操作簡單、重現性好、結果穩定的煙酸和煙酰胺檢測方法就尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，其操作簡單、重現性好、結果穩定。

本發明提供了一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，包括：

a、將牛奶或奶粉定容混勻得到溶解液；

b、將溶解液殺菌，得到滅菌液，存儲滅菌液；

c、配制煙酸和煙酰胺的培養基液，將培養基液殺菌得到殺菌基液，存儲殺菌基液；

d、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標準品溶液；

e、分別將殺菌基液、滅菌液、植物乳桿菌和標準品溶液加入微孔板條的相應微孔中，孵育得到測試液；

f、處理測試液，使微生物懸濁其中，用酶標儀讀取它們的混濁度；

g、繪制與標準品溶液相對應的測試液中煙酸和煙酰胺的濃度與測試液混濁度的標準曲線；

h、將溶解液相對應的測試液的混濁度代入標準曲線中，換算得到牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的再一種示意性的實施方式中，步驟a中牛奶的取樣量為1mL，且放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到溶解液。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的另一種示意性的實施方式中，步驟a中奶粉的取樣量為1g，且放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到溶解液。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟b中溶解液在超凈臺用0.2μm?或0.22μm?無菌濾膜過濾殺菌，得到滅菌液，將滅菌液存儲于1.5mL或2.0mL無菌試管中。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟c中加入10mL無菌水至煙酸和煙酰胺培養基中，蓋好瓶蓋，搖勻，得到培養基液，將培養基液在90-100℃水浴中加熱至少5?分鐘，其間振蕩至少2?次，迅速冷卻至室溫，使用0.2μm?或0.22μm?無菌濾膜過濾殺菌培養基液得到殺菌基液，將殺菌基液存儲于15mL無菌離心管中。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟d中配制了煙酸和煙酰胺濃度分別為0、0.016、0.032、0.064、0.096、0.160mg/100g的標準品溶液，且標準品溶液的配制方法為加入1.8-2.2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標準品瓶中得到煙酸和煙酰胺標準品，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標準品，用標準品瓶中的溶液沖洗移液器尖，得到標準品濃縮液，使用標準品濃縮液配制得到不同濃度的標準品溶液。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟e中取與標準品溶液和滅菌液份數對應的微孔板條，分別用移液器吸取150μL殺菌基液至板條的微孔中，分別用移液器吸取150μL標準品溶液和滅菌液至指定的全部微孔中，分別用移液器吸取植物乳桿菌至板條的微孔中，用粘合箔蓋住微孔板條的微孔，在37℃±1℃黑暗條件下孵育44-48小時。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟f中將微孔板在漩渦混合器上振蕩，使微生物懸濁在測試液中，用破壞微孔測試液表面所有的泡沫，用酶標儀在610-630nm或540-550nm條件下分別讀取測試液的混濁度。

在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟h中將與溶解液相對應的測試液的混濁度代入標準曲線方程中得到其煙酸和煙酰胺濃度，將與溶解液相對應的測試液的煙酸和煙酰胺濃度換算得到牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。