[發(fā)明專利]一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110107765.1
• 申請日: 2011-04-28
• 公開（公告）號: CN102759605A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉志楠;喻東威;趙源;劉曉川;薛志清;杜麗;李梅;劉衛(wèi)星
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司
• 主分類號: G01N33/04
• 分類號: G01N33/04;G01N33/569
• 代理公司: 北京漢德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11328
• 代理人: 莊一方

1.??一種牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，其包括：

a、將牛奶或奶粉定容混勻得到溶解液；

b、將所述溶解液殺菌，得到滅菌液，存儲所述滅菌液；

c、配制煙酸和煙酰胺的培養(yǎng)基液，將所述培養(yǎng)基液殺菌得到殺菌基液，存儲所述殺菌基液；

d、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

e、分別將所述殺菌基液、所述滅菌液、植物乳桿菌和所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入微孔板條的相應(yīng)微孔中，孵育得到測試液；

f、處理所述測試液，使微生物懸濁其中，用酶標(biāo)儀讀取它們的混濁度；

g、繪制與所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的所述測試液中煙酸和煙酰胺的濃度與所述測試液混濁度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

h、將所述溶解液相對應(yīng)的所述測試液的混濁度代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線中，換算得到所述牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。

2.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟a為取所述牛奶1mL，放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到所述溶解液。

3.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟a為取所述奶粉1g，放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到所述溶解液。

4.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟b中所述溶解液在超凈臺用0.2μm?或0.22μm?無菌濾膜過濾殺菌，得到所述滅菌液，將所述滅菌液存儲于1.5mL或2.0mL無菌試管中。

5.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟c中加入10mL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻，得到所述培養(yǎng)基液，將所述培養(yǎng)基液在90-100℃水浴中加熱至少5?分鐘，其間振蕩至少2?次，迅速冷卻至室溫，使用0.2μm?或0.22μm?無菌濾膜過濾殺菌所述培養(yǎng)基液得到所述殺菌基液，將所述殺菌基液存儲于15mL無菌離心管中。

6.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟d中配制了煙酸和煙酰胺濃度分別為0、0.016、0.032、0.064、0.096、0.160mg/100g的所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，且所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制方法為加入1.8-2.2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中得到煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，使用所述標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制得到不同濃度的所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

7.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟e中取與所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和所述滅菌液份數(shù)對應(yīng)的微孔板條，分別用移液器吸取150μL所述殺菌基液至板條的全部微孔中，分別用移液器吸取150μL所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和所述滅菌液至指定的微孔中，分別用移液器吸取植物乳桿菌至板條的微孔中，用粘合箔蓋住微孔板條的微孔，在37℃±1℃黑暗條件下孵育44-48小時。

8.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟f中將所述微孔板在漩渦混合器上振蕩，使微生物懸濁在所述測試液中，用破壞所述測試液表面所有的泡沫，用酶標(biāo)儀在610-630nm或540-550nm條件下分別讀取所述測試液的混濁度。

9.??如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中步驟h中將與所述溶解液相對應(yīng)的測試液的混濁度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中得到其煙酸和煙酰胺濃度，將與所述溶解液相對應(yīng)的測試液的煙酸和煙酰胺濃度換算得到所述牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。