[發明專利]類風濕關節炎圖譜模型的構建方法及其圖譜模型

有效

• 申請號: 201110107562.2
• 申請日: 2011-04-27
• 公開（公告）號: CN102262098A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 戴勇;歐陽昕
• 申請（專利權）人: 戴勇;歐陽昕
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08;G01N1/28
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

【技術領域】

本發明涉及一種獲取作為中間結果的類風濕關節炎信息，尤其涉及一種類風濕關節炎圖譜模型的構建方法，以及采用該構建方法所構建的類風濕關節炎的圖譜模型。

【背景技術】

類風濕關節炎(Rheumatoid?arthritis，RA)是一種常見全身炎癥性自身免疫性疾病，具有病程長，并發癥多的特點。雖然臨床上呈緩解期及活動期交替出現，但最終均導致骨關節的損害至患者活動能力喪失。通過早期的干預及治療，才能有效控制病情，延緩其發展。然而經多年的研究，其分子發病機制始終不是十分清楚。這就給疾病的早期診斷和治療帶來巨大的挑戰。目前，臨床上對RA的診斷多依靠臨床癥狀及各種各樣的自身抗體的檢測，但對于大量不典型的患者效果并不佳。

近年隨著基因組學及蛋白組學技術的不斷發展，應用指紋圖譜對RA進行診斷及病情的評估已被證明比單一的標志物更有優勢。而隨著后基因組學時代的來臨，代謝組學已成為系統生物學研究發展的下一個重點方向，而代謝指紋圖譜更是為疾病的診斷提供一個新的思路。由于各種先進硬件設施的發展和新技術的出現以及數據分析軟件的進步使得全面代謝組學研究逐漸成為發現生物標志物的另一種有效手段。而由差異代謝物構建的指紋圖譜在臨床多種疾病的診斷及預后評估中蘊涵巨大的應用價值。

但是，如何結合代謝組學方法對類風濕關節炎進行綜合分析，目前尚未有具體的研究結果和技術信息。

因此，現有技術需要改進。

【發明內容】

有鑒于此，有必要提出一種類風濕關節炎圖譜模型的構建方法及其圖譜模型。

本發明的一個技術方案是，一種類風濕關節炎圖譜模型的構建方法，其包括以下步驟：A1、分別獲取試驗組和參照組已經脫離人體的靜脈血液3ml，靜置25至30分鐘；A2、分別以3000至4000轉/分鐘離心8至10分鐘；A3、分別從3/4液面高度處吸取上清液600ul，置于零下60℃至零下80℃環境中保存；A4、在室溫凍融后，分別從3/4液面高度處吸取200ul所述上清液，加入D₂O為99.5％的重水200ul混合，得到混合液；其中，在吸取所述上清液時，一直保持3/4液面高度；A5、分別將所述混合液置于5mm核磁管，通過Varian?NMR600MHz核磁共振譜儀獲取所述混合液的一維氫譜的譜圖；A6、采用TopSpin軟件分別對所述一維氫譜的譜圖進行傅立葉變換、相位調整、基線校正、定標及積分處理，得到所述上清液的類風濕關節炎譜圖；其中，在進行傅立葉變換時乘以增寬因子為1Hz的指數窗函數，以內標乳酸在1.33ppm的雙峰進行定標處理，并且，在進行積分時，去除水峰積分值后將其余積分值進行加合和歸一化處理；A7、采用SIMCA-P⁺軟件對試驗組和參照組中的各個上清液的類風濕關節炎譜圖建立主成分分析模型和偏最小二乘法模型，進行多元統計分析；其中，所述多元統計分析包括主成分分析、偏最小二乘法-判別分析及其正交信號校正處理；A8、根據多元統計分析的分析結果，建立所述類風濕關節炎圖譜模型。

應用于上述方案，所述的構建方法中，步驟A7中，所述多元統計分析采用平均中心化換算和自適換算的數據標度換算方式，并且，在所述多元統計分析之后還執行以下步驟A71：采用10折或20折交叉驗證法檢驗各模型的質量，作為所述分析結果的一部分。

應用于上述方案，所述的構建方法中，步驟A71之后還執行以下步驟A72：采用交叉驗證后得到的模型可解釋變量以及模型可預測度，評判各模型的有效性，作為所述分析結果的一部分。

應用于上述方案，所述的構建方法中，步驟A72之后還執行以下步驟A73：通過排列實驗隨機120次至200次改變分類變量的排列順序得到相應的隨機模型可預測度，進一步檢驗各模型的有效性，作為所述分析結果的一部分。

應用于上述各方案，所述的構建方法中，步驟A5中，所述通過Varian?NMR600MHz核磁共振譜儀獲取所述混合液的一維氫譜的譜圖，包括選用標準預飽和壓水的NOESY1DPR序列，弛豫延遲時間為2.4至2.5秒，混合時間為100毫秒，累加次數128次。

應用于上述各相關方案，所述的構建方法中，所述弛豫延遲時間及所述混合時間內，都進行飽和照射。

應用于上述各相關方案，所述的構建方法中，所述室溫為20至25℃，采集時間為0.9541s，譜寬為8384.9Hz。

應用于上述各方案，所述的構建方法中，步驟A6中，積分區間為9.0-0.39ppm，積分間距為0.004至0.005ppm。