[發(fā)明專利]干細(xì)胞篩選系統(tǒng)、其制備方法及干細(xì)胞的篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110106899.1
• 申請日: 2011-04-27
• 公開（公告）號: CN102212460A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉蘭濤;黃博;周躍;李長青;熊承杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 逯長明

1.一種干細(xì)胞篩選系統(tǒng)，包括：

固體支持物；

涂布在所述固體支持物上的纖維連接蛋白和牛血清白蛋白。

2.權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞篩選系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟：

將纖維連接蛋白與緩沖溶液混合，得到纖維連接蛋白溶液；

將所述纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物中進(jìn)行孵育，得到涂布有纖維連接蛋白的固體支持物；

向所述涂布有纖維連接蛋白的固體支持物中加入牛血清白蛋白，得到干細(xì)胞篩選系統(tǒng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述纖維連接蛋白溶液的濃度為5μg/mL～20μg/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述孵育的溫度為0℃～5℃，所述孵育的時(shí)間為10h以上。

5.一種干細(xì)胞的篩選方法，包括以下步驟：

a)提供軟骨終板細(xì)胞重懸液；

b)將所述軟骨終板細(xì)胞重懸液加入到權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的干細(xì)胞篩選系統(tǒng)中進(jìn)行孵育，得到干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述軟骨終板細(xì)胞終濃度為200個(gè)細(xì)胞/cm²～600個(gè)細(xì)胞/cm²。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述孵育的溫度為35℃～38℃，所述孵育的時(shí)間為5min～30min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟a)具體包括：

a1)用膠原酶將軟骨終板進(jìn)行消化，離心后得到軟骨終板細(xì)胞團(tuán)；

a2)用DMEM/F12培養(yǎng)液對所述軟骨終板細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行重懸，得到軟骨終板細(xì)胞重懸液。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，還包括：

對所述干細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的篩選方法，其特征在于，采用含有5wt％～20wt％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液對所述干細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。