[發明專利]一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法

無效

• 申請號: 201110102969.6
• 申請日: 2011-04-25
• 公開（公告）號: CN102262153A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 張金枝;柴仕淦;鄒其超;陳照;賈釵;毛端平;程時遠;閆翠娥
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/96
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

技術領域

本發明屬于寄生蟲病免疫診斷技術領域，具體涉及一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法。

背景技術

日本血吸蟲病是一種由日本血吸蟲引起的熱帶疾病。根據世界衛生組織(WHO)報道，每年有許多被感染上日本血吸蟲病。由于我國日本血吸蟲病流行區人口眾多，故日本血吸蟲病仍然是我國重點防治的寄生蟲病之一。診斷是治療疾病的一個關鍵環節。所以，快速、準確的診斷技術是一個有效控制疾病的先決條件。尋找簡便、快速、價廉、便于推廣應用、具有普查、臨床實際診斷和療效考察價值的檢測方法，是當前迫切需要解決的問題。

目前日本血吸蟲病診斷主要有病原學診斷和免疫診斷兩大類。病原學檢查方法不易檢出輕度感染病人和慢性病患者，而且多數病原學方法操作繁瑣，已難以用于大規模篩選疾病。免疫診斷方法具有敏感性高、使用方便等優點，已逐漸成為臨床和現場日本血吸蟲病感染篩查的重要手段。現行的免疫診斷技術如酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、間接熒光試驗(IFA)、環卵沉淀試驗(COPT)、補體結合試驗(CF)、放射免疫試驗(RIA)等方法，或是需要特殊的設備，或是檢測時間太長，以及試劑需要特殊運輸、儲存條件等缺點，均不適宜在現場大規模應用。因此發明一種準確、簡便、快速、低成本、不需要任何儀器設備的檢測技術是當前日本血吸蟲病診斷的迫切需要。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：它包括以下步驟：

(1)、將丙烯酸酯單體與苯乙烯、交聯劑加入到去離子水、引發劑、pH調節劑組成的混合乳液中，按照滴加法進行無皂乳液聚合，獲得高分子乳液，將制得的乳液進行離心分離，傾去上層清液，加去離子水稀釋后再離心分離，純化后的膠乳用去離子水稀釋至固含量為1-3％，得到高分子膠乳備用；

(2)、將高分子膠乳離心分離后取下層沉淀物，加NaCl溶液洗滌分散，再加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，在4℃下反應2小時后，在4℃、0.1mol.L^-1NaCl溶液中透析，然后離心分離，在沉淀中加磷酸鹽緩沖液重新分散沉淀物，加日本血吸蟲病蟲卵抗原和乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，室溫放置1-4小時，然后離心分離，沉淀物用磷酸鹽緩沖液洗滌干凈，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液分散。

其中步驟(1)的高分子膠乳的反應體系中，各組分的重量百分比含量如下：

引發劑0.10～0.50％、交聯劑0.31～1.94％、苯乙烯4～12％、丙烯酸酯單體2～10％、丙烯酸0.16～2.44％、pH調節劑0.17～0.87％、余量為水。

所述的丙烯酸酯單體為丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸正丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸正丁酯或甲基丙烯酸異丁酯中的一種或多種；所述的引發劑為過硫酸銨、過硫酸鉀、雙氧水、硫酸亞鐵中的一種或多種；所述的苯乙烯為甲基苯乙烯或乙基苯乙烯；所述的交聯劑為二乙烯基苯、丙烯酸、丙烯酸-β-羥乙酯、甲基丙烯酸-β-羥乙酯、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺中一種或多種；所述的pH調節劑為碳酸氫鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫鈉中的一種或多種。進行離心分離時，離心時間為15分鐘，轉速為15000-20000rpm。

一種檢測日本血吸蟲抗體的方法，它包括以下步驟：

a、免疫反應：取培養板若干，每孔中加入pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液150-250μL，取日本血吸蟲病人血清等比稀釋，然后加固載了日本血吸蟲卵抗原的高分子膠乳試劑10-20μL，搖勻，并以pH7.2的PBS、正常人血清作對照；

b、檢測：以凝集出現快慢，凝集顆粒大小，邊緣凝集厚度及中間清亮現象判斷凝集程度，出現自凝現象即感染日本血吸蟲。

其中所述的高分子膠乳試劑由下述方法制備：

(1)、將丙烯酸酯單體與苯乙烯、交聯劑加入到去離子水、引發劑、pH調節劑組成的混合乳液中，按照滴加法進行無皂乳液聚合，獲得高分子乳液，將制得的乳液進行離心分離，傾去上層清液，加去離子水稀釋后再離心分離，純化后的膠乳用去離子水稀釋至固含量為1-3％，得到高分子膠乳備用；其中高分子膠乳的反應體系中，各組分的重量百分比含量如下：引發劑0.10～0.50％、交聯劑0.31～1.94％、苯乙烯4～12％、丙烯酸酯單體2～10％、丙烯酸0.16～2.44％、pH調節劑0.17～0.87％、余量為水；