[發明專利]一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法

無效

• 申請號: 201110102969.6
• 申請日: 2011-04-25
• 公開（公告）號: CN102262153A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 張金枝;柴仕淦;鄒其超;陳照;賈釵;毛端平;程時遠;閆翠娥
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/96
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，它包括以下步驟：

(1)、將丙烯酸酯單體與苯乙烯、交聯劑加入到去離子水、引發劑、pH調節劑組成的混合乳液中，按照滴加法進行無皂乳液聚合，獲得高分子乳液，將制得的乳液進行離心分離，傾去上層清液，加去離子水稀釋后再離心分離，純化后的膠乳用去離子水稀釋至固含量為1-3％，得到高分子膠乳備用；

(2)、將高分子膠乳離心分離后取下層沉淀物，加NaCl溶液洗滌分散，再加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽，在4℃下反應2小時后，在4℃、0.1mol.L-1NaCl溶液中透析，然后離心分離，在沉淀中加磷酸鹽緩沖液重新分散沉淀物，加日本血吸蟲病蟲卵抗原和乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽，室溫放置1-4小時，然后離心分離，沉淀物用磷酸鹽緩沖液洗滌干凈，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液分散。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中步驟(1)的高分子膠乳的反應體系中，各組分的重量百分比含量如下：

引發劑0.10～0.50％、交聯劑0.31～1.94％、苯乙烯4～12％、丙烯酸酯單體2～10％、丙烯酸0.16～2.44％、pH調節劑0.17～0.87％、余量為水。

3.根據權利要求2所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中所述的丙烯酸酯單體為丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸正丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸正丁酯或甲基丙烯酸異丁酯中的一種或多種。

4.根據權利要求2所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中所述的引發劑為過硫酸銨、過硫酸鉀、雙氧水、硫酸亞鐵中的一種或多種。

5.根據權利要求2所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中所述的苯乙烯為甲基苯乙烯或乙基苯乙烯。

6.根據權利要求2所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中所述的交聯劑為二乙烯基苯、丙烯酸、丙烯酸-β-羥乙酯、甲基丙烯酸-β-羥乙酯、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺中一種或多種。

7.根據權利要求2所述的一種快速檢測日本血吸蟲抗體的高分子膠乳試劑盒的制備方法，其中所述的pH調節劑為碳酸氫鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫鈉中的一種或多種。

8.一種檢測日本血吸蟲抗體的方法，它包括以下步驟：

a、免疫反應：取培養板若干，每孔中加入pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液150-250μL，取日本血吸蟲病人血清等比稀釋，然后加固載了日本血吸蟲卵抗原的高分子膠乳試劑10-20μL，搖勻，并以pH7.2的PBS、正常人血清作對照；

b、檢測：以凝集出現快慢，凝集顆粒大小，邊緣凝集厚度及中間清亮現象判斷凝集程度，出現自凝現象即感染日本血吸蟲。

9.根據權利要求8所述的一種檢測日本血吸蟲抗體的方法，其中所述的高分子膠乳試劑由下述方法制備：

(1)、將丙烯酸酯單體與苯乙烯、交聯劑加入到去離子水、引發劑、pH調節劑組成的混合乳液中，按照滴加法進行無皂乳液聚合，獲得高分子乳液，將制得的乳液進行離心分離，傾去上層清液，加去離子水稀釋后再離心分離，純化后的膠乳用去離子水稀釋至固含量為1-3％，得到高分子膠乳備用；其中高分子膠乳的反應體系中，各組分的重量百分比含量如下：引發劑0.10～0.50％、交聯劑0.31～1.94％、苯乙烯4～12％、丙烯酸酯單體2～10％、丙烯酸0.16～2.44％、pH調節劑0.17～0.87％、余量為水；

(2)、將高分子膠乳離心分離后取下層沉淀物，加NaCl溶液洗滌分散，再加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽，在4℃下反應2小時后，在4℃、0.1mol.L^-1NaCl溶液中透析，然后離心分離，在沉淀中加磷酸鹽緩沖液重新分散沉淀物，加日本血吸蟲病蟲卵抗原和乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽，室溫放置1-4小時，然后離心分離，沉淀物用磷酸鹽緩沖液洗滌干凈，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液分散。

10.根據權利要求9所述的一種檢測日本血吸蟲抗體的方法，其中所述的丙烯酸酯單體為丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸正丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸正丁酯或甲基丙烯酸異丁酯中的一種或多種；所述的引發劑為過硫酸銨、過硫酸鉀、雙氧水、硫酸亞鐵中的一種或多種；所述的苯乙烯為甲基苯乙烯或乙基苯乙烯；所述的交聯劑為二乙烯基苯、丙烯酸、丙烯酸-β-羥乙酯、甲基丙烯酸-β-羥乙酯、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺中一種或多種；所述的pH調節劑為碳酸氫鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫鈉中的一種或多種。