[發明專利]一種低溶劑殘留的糖蛋白組合物及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201110102073.8
• 申請日: 2011-04-22
• 公開（公告）號: CN102743742A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李勇;季斌;季曉銘
• 申請（專利權）人: 上海天偉生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K38/24
• 分類號: A61K38/24;A61P15/08
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

技術領域

本發明涉及蛋白質藥物的純化領域。尤其涉及含有治療不孕癥的糖蛋白的干燥方法。

背景技術

治療不孕癥的糖蛋白是一類結構接近的物質，包括絨毛膜促性腺激素(HCG)、絕經期促性腺素(HMG)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)，其中絕經期促性腺素是含有卵泡刺激素和黃體生成素且兩者成一定比例(1∶0.1-1)的混合物。

HCG、FSH、LH都是由α鏈和β鏈兩個亞基通過非共價鍵的形式結合，其中它們的α亞基完全相同，具有92個氨基酸，分子量約為14500D，第52和78位置上的天冬酰胺是發生N-糖基化的氨基酸。HCG的β亞基有145-147個氨基酸，分子量22200-39000D，其中第13、30位置上的天冬酰胺以及第121、127、132、145位置是發生糖基化的地方。FSH的β亞基由111個氨基酸組成，分子量約為18000D，其中第7和24位置上的天冬酰胺是發生N-糖基化的氨基酸。而LH的β亞基由121個氨基酸組成，分子量約為14800D。

臨床上HCG、HMG、FSH、LH主要用于治療不育癥以及體外輔助生殖。它們可以從特定婦女(孕期或絕經期)的尿液中提取出來，也可通過DNA重組技術而制備。

治療不孕癥的糖蛋白的第一代產品是上世紀60年代Serono公司的Profasi(HCG)、Pergonal(HMG)，它們的純度都較低，含有大量雜質。上世紀80年代之后，Serono公司分別推出了Metrodin-HP，它是一種雜質含量很低的高純度的FSH制劑；后來又推出利用DNA重組技術生產的Gonal-F(rFSH)、Luveris(rLH)等，另外，Ferring公司也推出了高純度絕經期促性腺素-Menopur。

由此可見，目前市場上都在致力于高純度糖蛋白的開發和應用，來替代普通的低純度產品，以克服普通低純度產品中的雜蛋白造成的過敏反應。

CN1309567A公開了含有FSH或其變體的液體制劑。但是，因為液體形式必須保存在-20℃以下，否則糖蛋白容易失活，液體形式不容易保存和運輸；液體形式由于會遇到凍結-溶解過程，甚至是反復的凍結-溶解過程，更容易導致糖蛋白失活；液體形式還會遇到包裝容器在低溫下接近脆性點容易破裂的危險等。而對于制劑成品來說，液體形式除了不容易運輸外，還遇到液體形式的糖蛋白藥物的穩定性較差，而且必須要加防腐劑才能保證在有效期內微生物不會滋生，給臨床應用帶來安全性的隱患。

因此，固體形式的糖蛋白組合物更適合工業化生產。而固體形式的獲得主要是通過冷凍干燥和真空干燥的手段，但高純度的糖蛋白在冷凍干燥的過程中很容易發生變性失活，其變性失活主要表現為完整分子降解成α鏈和β鏈兩個亞基，而這些亞基也是雜質，它們是沒有療效或可能產生副作用的異構物，在投料時都要多加10-30％的量，以抵消冷凍干燥過程的失活情況，而且成品中還會產生一定量的亞基，降低了產品的純度。CN101347613A公開了一種制備糖蛋白組合物的凍干方法可以制備高純度的幾乎不含亞基的糖蛋白凍干組合物，但是用此法去除有機溶劑的效果并不理想。

而真空干燥通常是將有機溶劑與糖蛋白溶液充分混和，形成沉淀后再脫水，然后將沉淀進行真空干燥，這種方法雖然可以減小糖蛋白變性失活，但是干燥后的糖蛋白中的有機溶劑含量較高，質量百分含量超過1％。有機溶劑大多都對人體有害，2010年中國藥典明確規定藥品中乙醇限度為0.5％。

因此，本領域迫切需要開發出一種能降低糖蛋白中有機溶劑殘留的真空干燥方法，并由此獲得低有機溶劑殘留的糖蛋白組合物。

發明內容

本發明旨在提供一種低有機溶劑殘留的糖蛋白組合物，以及獲得上述糖蛋白組合物的真空干燥方法。

本發明一方面提供了一種低有機溶劑含量的糖蛋白組合物，其中有機溶劑質量百分含量不超過0.5％，優選不超過0.3％，更優地不超過0.1％。

其中，所述有機溶劑為乙醇，丙酮或甲醇。

其中，所述的糖蛋白選自絨毛膜促性腺激素、絕經期促性腺素、卵泡刺激素、黃體生成素、或其混合。

其中，所述絨毛膜促性腺激素是人尿來源和/或重組的人絨毛膜促性腺激素、或其變體；所述絕經期促性腺素是人尿來源和/或重組的人絕經期促性腺素、或其變體；所述卵泡刺激素是人尿來源和/或重組的人卵泡刺激素、或其變體；所述黃體生成素是人尿來源和/或重組的人黃體生成素、或其變體。