[發明專利]過濾染色計數細胞的方法及裝置

有效

• 申請號: 201110100618.1
• 申請日: 2011-04-21
• 公開（公告）號: CN102288531A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 李京寶;商澎;李亞楠;騫愛榮
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 顧潮琪

1.一種過濾染色計數細胞的方法，其特征在于包括下述步驟：

1)準備好需要計數的未知數量的實驗組細胞和至少4組已知數量的標準組細胞懸液，各組細胞懸液的體積相同；

2)每個細胞懸液樣品對應一個過濾裝置，分別將各組細胞懸液通過過濾裝置，使細胞截留在濾膜之上；

3)分別使用細胞懸液2倍以上體積的磷酸鹽緩沖液清洗截留在過濾裝置上的細胞；

4)分別加入細胞懸液1倍以上體積的濃度為0.1％～1％的結晶紫溶液于過濾裝置中浸泡細胞10分鐘～1小時；

5)分別吸去結晶紫溶液，用細胞懸液5倍以上體積磷酸鹽緩沖液清洗過濾裝置中的細胞；

6)分別排出過濾裝置中殘存液體；

7)分別用細胞懸液1倍以上體積的濃度為3％～30％的醋酸溶液沖洗過濾裝置，收集濾液；

8)分別將所得濾液經稀釋3倍體積以上后，使用可見分光光度計，測量570nm波長處光密度；

9)結合標準組已知細胞數量與光密度繪制標準曲線，得到光密度I_標準與細胞數量N_標準的關系公式：I_標準＝a×N_標準+b，其中a為一元線性相關系數，b為截距，皆通過標準曲線計算得知；

10)根據標準曲線和實驗組細胞樣品的光密度計算實驗組細胞數量，即N_實驗＝(I_實驗-b)/a。

2.根據權利要求1所述的過濾染色計數細胞的方法，其特征在于：所述的細胞懸液由懸浮生長細胞直接使用，或貼壁細胞經過消化步驟形成。

3.根據權利要求1所述的過濾染色計數細胞的方法，其特征在于：所述的結晶紫溶液采用水、生理鹽水或磷酸鹽緩沖液作為溶劑配制。

4.一種實現權利要求1所述方法的過濾染色計數細胞裝置，包括洗滌液容器、染色液容器、脫色液容器、廢液容器、過濾裝置、泵系統、比色裝置、三通閥和計算機，其特征在于：實驗組及標準組細胞懸液通過三通閥分別與洗滌液容器、染色液容器相連通，之后通過三通閥與脫色液容器相連通至過濾裝置，過濾裝置的輸出口通過泵系統與比色裝置相連，比色裝置將測量數據反饋于計算機；待檢測完成后，由和比色裝置相連的導管將廢液排除到廢液容器中；在上述各個環節中，由計算機控制各個三通閥、泵系統以及比色裝置工作。