[發明專利]一種林可霉素的分離方法

有效

• 申請號: 201110098514.1
• 申請日: 2011-04-19
• 公開（公告）號: CN102746348A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李繼安;藍鴻
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07H15/16
• 分類號: C07H15/16;C07H1/06
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;朱水平

技術領域

本發明涉及一種林可霉素的分離方法。

背景技術

林可霉素(Lincomycin)是一種林可胺類堿性抗生素，易溶于水和甲醇，臨床上用其鹽酸鹽，主要用于治療革蘭氏陽性菌起的感染。用林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)發酵生產林可霉素的過程中除產生林可霉素外，也產生林可霉素B組分等其他結構類似物。林可霉素B組分是一種有毒成分，需要除去，否則會影響產品質量，尤其是在加工林可霉素衍生物時對B組分含量的控制更為嚴格。

傳統工藝一般采用溶媒萃取法從發酵液中提取林可霉素。其中，丁醇萃取法的缺點是溶劑消耗大、操作條件和環境差，結晶成品的B組分含量高；使用高碳醇，如辛醇作為萃取劑時，可以在一定程度上降低B組分的含量，但氣味難聞，操作復雜；CN?101348508A專利文獻中公開了一種用樹脂從發酵液中提取林可霉素的方法，該方法省去了萃取步驟，但缺點是B組分的含量仍然較高(0.7％～1.3％)。鑒于現有林可霉素分離方法存在上述缺陷，該現狀亟待解決。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服了現有技術中林可霉素的分離方法溶劑消耗大或操作復雜，并且均存在獲得產品中林可霉素B組分含量較高的缺陷，提供了一種溶劑消耗適中、操作簡便，且產品林可霉素純度可達98％以上，而林可霉素B組分含量0.5％以下的林可霉素的分離方法。

本發明的林可霉素的分離方法包括如下步驟：將含林可霉素發酵液酸化后過濾，然后調堿性后再次過濾取濾液，之后上樣聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附樹脂柱，先用與上樣液同pH的堿性水溶液洗脫除雜，再用正丁醇洗脫林可霉素，收集林可霉素正丁醇溶液進行濃縮、酸化并結晶，然后再用丙酮重結晶，即可。

本發明中，所述的含林可霉素發酵液為本領域常規制備林可霉素的微生物菌發酵液，一般由林肯鏈霉菌Streptomyces?lincolnensis經過本領域常規方法發酵培養獲得。所述的林肯鏈霉菌具體菌種沒有特殊限定，常規能夠生產林可霉素的菌種均可使用，如林肯鏈霉菌Streptomyces?lincolnensis?NRRL2936、林肯鏈霉菌Streptomyces?lincolnensis?CPCC?280065(中國藥用微生物菌種保藏管理中心可售)、林肯鏈霉菌Streptomyces?lincolnensis?CPCC?240859(中國藥用微生物菌種保藏管理中心可售)等。其中，所述的林肯鏈霉菌經培養發酵獲得含林可霉素發酵液具體菌種不受限定是因為林可霉素是林肯鏈霉菌的次級代謝產物，不同的具體菌株雖然在林可霉素的產量、雜質的比例上有所不同，但發酵液的主要成分相對固定，因此不同具體菌種林肯鏈霉菌制備的發酵液均適用本發明方法。

本發明中，所述的含林可霉素發酵液酸化后過濾，然后調堿性后再次過濾取濾液為本領域常規分離林可霉素處理發酵液的常規預處理操作，其中，酸化是為了絡合鈣離子等金屬離子以沉淀雜質蛋白并利于過濾，調堿性后再次過濾是為了沉淀除去堿性不溶雜質進一步澄清濾液，均屬于常規現有操作。其中，所述的酸化較佳的為草酸調pH?2-4，更佳為草酸調pH?3；所述的調堿性較佳的為氫氧化鈉調pH?9-11，更佳的為氫氧化鈉調pH?10；所述的過濾較佳的為板框過濾。

本發明中，所述的聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附樹脂(PS-DVB反相吸附樹脂)為本領域常規使用的聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附樹脂，較佳的型號為NM?PS100或微球1號，更佳的為NM?PS100。其中，所述的PS-DVB反相吸附樹脂的粒徑較佳的為50μm-120μm，孔徑較佳的為更佳的為

本發明中，所述的上樣的上樣量較佳的為≤50mg/mL樹脂。

本發明中，所述的上樣聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附樹脂柱的吸附流速較佳的為0.02BV/min-0.04BV/min，其中所述的BV/min為本領域常規計量術語，流速的一種表示方法，即單位時間通過的流體相當于樹脂體積的倍數。

本發明中，所述的與上樣液同pH的堿性水溶液較佳的為氫氧化鈉水溶液。其中，所述的pH值較佳的為9-11，更佳的為10。

本發明中，所述的與上樣液同pH的堿性水溶液的用量較佳的為4.5BV-5.5BV，更佳的為5BV。

本發明中，所述的正丁醇的用量較佳的為1.5BV-2.5BV。