[發(fā)明專利]沙冬青抗旱基因的篩選方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110093513.8 | 申請日: | 2011-04-14 |
| 公開(公告)號: | CN102732527A | 公開(公告)日: | 2012-10-17 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 夏新莉;尹偉倫;郭麗麗;龐濤 | 申請(專利權(quán))人: | 北京林業(yè)大學(xué) |
| 主分類號: | C12N15/29 | 分類號: | C12N15/29;C12N15/10 |
| 代理公司: | 北京匯信合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335 | 代理人: | 王秀麗 |
| 地址: | 100083 *** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 冬青 抗旱 基因 篩選 方法 | ||
1.一種沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:包括以下步驟
1)取干旱處理的沙冬青
2)采用2×CTAB的方法提取RNA
3)RNA純化
4)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
5)高通量測序
6)獲取差異表達序列
7)檢索及軟件分析獲得抗旱基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述沙冬青的種子使用70%體積比的乙醇浸泡,然后用10%質(zhì)量比的次氯酸鈣消毒后,使用無菌水沖洗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟2)提取RNA經(jīng)過以下流程
(1)將沙冬青真葉或莖段于-20℃研磨成粉,加入預(yù)熱65℃的緩沖液,震蕩,于65℃水浴
(2)加入苯酚/氯仿/異戊醇,于4℃離心,取上清
(3)加入LiCl,-20℃放置
(4)棄上清,70%體積比乙醇漂洗沉淀
(5)除去乙醇,加入無水乙醇-20℃放置
(6)于4℃離心,采用DEPC處理的水溶解沉淀
(7)瓊脂糖凝膠電泳,電壓檢測,-70℃貯藏。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟(2)、(3)重復(fù)兩次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟5)測序后進行污染分析,隨機選取若干條讀長組裝后,于NCBI?NR數(shù)據(jù)庫進行比對。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟5)測序后使用DNASTAR?NGEN軟件將測序結(jié)果和野生型測序結(jié)果進行組合組裝。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟6)中將獲得差異表達基因進行初步篩選,選取差異表達4倍以上的基因。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述沙冬青抗旱基因的篩選方法,其特征在于:所述步驟6)、7)中應(yīng)用DNASTAR:ArrayStar軟件對轉(zhuǎn)錄組進行了差異表達分析。
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