[發(fā)明專利]小麥TaTOC1基因及其克隆方法和應(yīng)用無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110093145.7 | 申請(qǐng)日: | 2011-04-14 |
| 公開(公告)號(hào): | CN102220347A | 公開(公告)日: | 2011-10-19 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 張憲省;趙翔宇;陳祥彬;葉興國;潘衍有 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12N15/29 | 分類號(hào): | C12N15/29;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/00 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 271018 *** | 國省代碼: | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 小麥 tatoc1 基因 及其 克隆 方法 應(yīng)用 | ||
1.小麥TaTOC1基因,其特征在于,包括TaTOC1-A、TaTOC1-B、TaTOC1-D,TaTOC1-A核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1;TaTOC1-B核苷酸序列為SEQ?ID?NO:2;TaTOC1-D核苷酸序列為SEQ?ID?NO:3。
2.小麥TaTOC1基因的克隆方法,其特征在于,包括以下步驟:1)利用Trizol試劑盒提取總RNA;2)第一條鏈的合成:取2μg總RNA,加入5×反應(yīng)緩沖液4μl,10mM脫氧核糖核酸2μl,核糖核酸酶抑制劑0.5μl,引物oligodT1μl,反轉(zhuǎn)錄酶2μl,42℃反應(yīng)60分鐘,85℃放置10分鐘終止反應(yīng),稀釋至200μl;3)PCR反應(yīng);4)基因克隆:取2μl?PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體進(jìn)行連接,操作步驟按pMD18-T?Vector說明書進(jìn)行;然后連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株,在表面涂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷和X-gal的含100μg/ml氨芐青霉素的LB平板上生長過夜;挑取白色菌落,在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜;5)堿法提取質(zhì)粒DNA;6)序列測定;7)5′序列的分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥TaTOC1基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的應(yīng)用。
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