[發明專利]檢測豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法及其專用酶聯免疫試劑盒

無效

• 申請號: 201110090869.6
• 申請日: 2011-04-12
• 公開（公告）號: CN102199211A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 王保民;譚桂玉;南鐵貴;趙洪偉;高巍;王敏;孫碩;曹振;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/31;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC?No.4617的豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體雜交瘤細胞株CpTI?3D6分泌產生的。

2.保藏編號為CGMCC?No.4617的豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體雜交瘤細胞株CpTI?3D6。

3.權利要求1中所述的豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體在制備檢測豇豆胰蛋白酶抑制劑的酶聯免疫試劑盒中的應用。

4.一種檢測豇豆胰蛋白酶抑制劑的酶聯免疫試劑盒，含有權利要求1所述豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體、豇豆胰蛋白酶抑制劑的多克隆抗體、豇豆胰蛋白酶抑制劑標準品；所述豇豆胰蛋白酶抑制劑標準品為豇豆胰蛋白酶抑制劑。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述豇豆胰蛋白酶抑制劑標準品的濃度為100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.1ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL和0.39ng/mL。

6.根據權利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有用于標記所述豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體的標記酶。

7.根據權利要求4-6中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括包被緩沖液、洗滌液、底物緩沖液、終止緩沖液和封閉液；

所述包被緩沖液由Na₂CO₃、NaHCO₃和水組成；

以上各成分在包被緩沖液中的濃度分別為：Na₂CO₃0.01M和NaHCO₃0.04M；

所述洗滌液由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、吐溫-20和水組成；

以上各成分在洗滌液中的濃度分別為：Na₂HPO₄0.02M、KH₂PO₄0.0015M、NaCl0.14M和吐溫-20的體積百分比濃度為0.1％；

所述底物緩沖液由檸檬酸三鈉、Na₂HPO₄和水組成；

以上各成分在底物緩沖液中的濃度分別為：檸檬酸三鈉0.01M和Na₂HPO₄0.03M。

所述終止緩沖液由硫酸和水組成；

所述硫酸在所述終止緩沖液中的濃度為2M；

所述封閉液由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、脫脂牛奶和水組成；

以上各成分在封閉液中的濃度分別為：Na₂HPO₄0.02M、KH₂PO₄0.0015M、NaCl0.14M和脫脂牛奶的質量百分比濃度為3％。

所述標記酶為辣根過氧化物酶。

8.一種檢測豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法，包括如下步驟：將待測樣品進行前處理，得到樣品檢測液；再用權利要求4-7中任一所述的試劑盒對樣品檢測液進行檢測；

所述前處理的方法包括如下步驟：將所述待測樣品研磨后，用PBS緩沖液進行浸泡，得到浸泡后的混合物；將所述混合物進行離心，取上清，即得到樣品檢測液；所述浸泡的時間為12小時；所述離心的轉速為8000r/min和離心的溫度為4℃。

9.權利要求1中所述豇豆胰蛋白酶抑制劑單克隆抗體、權利要求4-7中任一所述試劑盒或權利要求8所述方法在鑒別轉CpTI基因植物中的應用。

10.一種輔助鑒別轉CpTI基因植物的方法，包括如下步驟：用權利要求4-7中任一所述試劑盒對待測植物進行檢測，以已知的非轉基因植物作為對照，若對待測植物進行檢測時檢測孔的吸光值大于所述對照的3倍，則確認所述待測植物為候選的轉CpTI基因植物。