[發(fā)明專利]丹參內(nèi)生真菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110087974.4
• 申請日: 2011-04-08
• 公開（公告）號: CN102676392A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓婷;明乾良;秦路平;張巧艷;黃寶康;張宏;鄭承劍;黃芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/20;C12R1/885
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 潘詩孟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及丹參內(nèi)生真菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

丹參酮是具有活血化瘀作用的中藥丹參主要的脂溶性成分，其中丹參酮I和丹參酮IIA是其主要的有效成分。丹參酮I抗菌活性很強(qiáng)，比小檗堿強(qiáng)許多倍；丹參酮IIA具有天然抗氧化作用，臨床在心腦血管疾病、腎臟疾病、肝臟疾病等方面應(yīng)用廣泛。目前，丹參酮I和丹參酮IIA主要來源于唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia?miltiorrhiza?Bunge)的根。雖然丹參資源區(qū)域廣闊，且已進(jìn)行大量的人工栽培；但是其分布星散，資源更新周期長，且人工栽培技術(shù)要求高，藥材質(zhì)量參差各異。隨著丹參酮I和丹參酮IIA眾多藥理活性的發(fā)現(xiàn)，其市場需求增大，通過直接采收丹參天然和人工資源將不能滿足市場需求。另一方面，丹參酮I和丹參酮IIA化學(xué)合成困難，難以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。研究者們試圖通過生物技術(shù)方法獲得丹參酮I和丹參酮IIA，因此，近年來這已成為人們關(guān)注的課題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種新的丹參內(nèi)生真菌，并提出其用途，即能夠通過微生物發(fā)酵產(chǎn)生丹參酮類化合物丹參酮I和丹參酮IIA。

為了解決前述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種丹參內(nèi)生真菌，命名為深綠木霉Trichoderma?atroviride。本發(fā)明所述的丹參內(nèi)生真菌是從唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salviamiltiorrhiza?Bunge)植物活體中采用內(nèi)生真菌分離純化技術(shù)分離獲得的，經(jīng)微生物分類學(xué)鑒定為深綠木霉(Trichoderma?atroviride)。該菌株已保藏，保藏日期為2011年03月27日，保藏號為CGMCC?No.4712，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院，郵編：100101。

本發(fā)明所述的丹參內(nèi)生真菌的固體培養(yǎng)特征為：在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上26℃培養(yǎng)，生長迅速，菌落在3天內(nèi)覆蓋直徑80mm的平板，呈輻射狀，表面疏松、平坦，菌絲無色；在培養(yǎng)的第5天明顯可見有孢子產(chǎn)生，最初為淡綠色，以后逐漸增多，呈現(xiàn)深綠色，產(chǎn)孢叢束排列成同心的輪紋；有椰子氣味(甜味)。

本發(fā)明所述的丹參內(nèi)生真菌的液體培養(yǎng)特征為：

(1)培養(yǎng)基PDA，搖瓶培養(yǎng)10天，培養(yǎng)溫度26±1℃；

(2)發(fā)酵培養(yǎng)特征：

培養(yǎng)第1-2天有少許1-2mm白色菌絲球出現(xiàn)，培養(yǎng)液澄清；培養(yǎng)第3-4天，菌絲球直徑增大至3-4mm，培養(yǎng)液開始變渾濁；培養(yǎng)第5-8天，菌球數(shù)量增多，培養(yǎng)液渾濁；培養(yǎng)第9-10天，白色菌球體直徑為4-5mm，培養(yǎng)液又變澄清。

本發(fā)明所述的丹參內(nèi)生真菌形態(tài)特征為：培養(yǎng)的菌絲體無色、分枝繁復(fù)，由具有橫隔的分枝菌絲構(gòu)成，分枝角度為近似90°；分生孢子梗的可育延伸物沒有或者很少產(chǎn)生，沒有不育的菌毛。雖然成對著生的分枝比較常見，但是分生孢子梗的典型分枝方式為單側(cè)分枝；分生孢子綠色，亞球形至卵圓形，沒有明顯的脫落痕跡，光滑，成簇著生于分生孢子梗的頂端。

本發(fā)明所述的丹參內(nèi)生真菌的ITS和5.8S?rDNA堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示為：

CCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCG

GGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCA

ACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAA

ATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGA

ACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTT

TGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTC

AACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGACCTCGGGAGCCCCTAAGACG

GGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGT

TTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCT

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