[發(fā)明專利]三重?zé)晒舛縍T-PCR檢測試劑盒及用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110085320.8 | 申請日： | 2011-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN102206713A | 公開（公告）日： | 2011-10-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳瑜;李蘭娟;崔大偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200 | 代理人： | 張法高;趙杭麗 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 三重 熒光 定量 rt pcr 檢測 試劑盒 用途 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，具體涉及一種三重（三種探針）實時熒光定量RT-PCR在一個反應(yīng)管內(nèi)同時檢測胃腸炎腹瀉患者的糞便樣本中札如病毒、星狀病毒和腺病毒核酸及檢測方法，可應(yīng)用于札如病毒、星狀病毒和腺病毒引起暴發(fā)疫情的實驗室應(yīng)急檢測。
背景技術(shù)
腹瀉病是世界范圍內(nèi)影響人類健康的常見病和多發(fā)病，特別是引起嬰幼兒發(fā)病和死亡的主要原因之一。研究表明每年超過200萬嬰幼兒死于腹瀉有關(guān)疾病及其并發(fā)癥，其中超過80%的患者來于欠發(fā)達(dá)國家。雖然至少25?種不同的細(xì)菌和病原微生物能引起胃腸炎，但是超過?75%?的病例是由病毒所引的。隨著分子生物檢測技術(shù)的提高，由病毒感染引起的腹瀉病越來越受到人們的關(guān)注。特別是秋冬季節(jié)嬰幼兒腹瀉80%以上由病毒引起。
病毒性胃腸炎（又稱病毒性腹瀉），是一組由多種病毒引起的急性腸道傳染病，臨床特點是起病急、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，排水樣便或稀便，也可有發(fā)病或全身不適等癥狀，病程短，死亡率低。病毒性胃腸炎是引起全世界特別是發(fā)展中國家兒童發(fā)病和死亡的主要原因之一。輪狀病毒（Rotavirus）、諾如病毒（Norovirus）、札如病毒（Human?Calicivirus）、腺病毒（Adenovirus）40型和41型以及星狀病毒（Astrovirus）被認(rèn)為是急性胃腸炎的常見病原。
輪狀病毒是引起嬰幼兒重癥腹瀉的主要病原。幾乎每個兒童在5歲以前都感染過輪狀病毒，初次感染通常引起急性腹瀉，癥狀較重，全世界每年大約有1億多的5歲以下兒童患輪狀病毒腹瀉，其中2500萬兒童需要門診治療，200萬兒童需要住院治療，而且每年約有35萬～59萬兒童死于輪狀病毒腹瀉，82%的死亡兒童發(fā)生在發(fā)展中國家，目前輪狀病毒的方法學(xué)研究比較成熟，如RT-PCR、ELISA和膠乳凝集分析等方法。
人類星狀病毒(Astrovirus，AstV)于1975年首次由Appleton等在急性胃腸炎患兒的糞便中用電鏡觀察到，此后，相繼在貓、鴨、羊、豬等動物的糞便中也發(fā)現(xiàn)了該類病毒。盡管發(fā)現(xiàn)AstV較早，但對其致病作用及其地位未引起重視，尤其是與腹瀉的關(guān)系在很長一段時間里認(rèn)為其只會引起散發(fā)的、較輕微的腹瀉。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對AstV的各項研究逐步深入，認(rèn)識至UAstV的感染率、發(fā)病率均高出預(yù)期結(jié)果，尤其在嬰幼兒人群中。一些國家的同類調(diào)查均發(fā)現(xiàn)AstV感染相當(dāng)普遍，其致病性越來越不容忽視。現(xiàn)已證實，AstV是引起嬰幼兒、老年人及免疫功能低下者腹瀉的重要原因之一，AstV急性胃腸炎既可散發(fā)感染也可引起暴發(fā)流行，同時也是醫(yī)源性感染的重要病原。星狀病毒占兒童住院腹瀉病例的2.5%-9%。
20世紀(jì)50年代初，Rowe等在切除的兒童腺體細(xì)胞培養(yǎng)物的自發(fā)性退行性病變中，首次發(fā)現(xiàn)腺病毒(Adenovirus，AdV)，1975年Flewett等首次應(yīng)用電鏡技術(shù)，從急性胃腸炎患兒糞便中發(fā)現(xiàn)與嬰幼兒胃腸炎直接相關(guān)的腺病毒。這些在電鏡下觀察到的大多數(shù)腺病毒，均不能在常規(guī)應(yīng)用的腺病毒細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)，這些腺病毒稱之為腸道腺病毒(Enteric?Adenovirus，EAdv)。腸道腺病毒是一種新的導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉的主要病原,主要感染5歲以下的嬰幼兒，特別是3歲以下的。腺病毒感染呈全球性分布，世界各地均有報道,暴發(fā)流行的報道亦多見。腸道腺病毒可通過人與人接觸傳播，也可通過糞-口途徑和呼吸道傳播。腸道腺病40/41型引起超過7.9%的兒童腹瀉病例。國內(nèi)沒有暴發(fā)流行的報道，近年來北京、天津、鄭州等地有少量散發(fā)報道。隨著對AstV研究的不斷深入，其流行病學(xué)意義日益受到重視。國外有關(guān)AstV感染的報道已經(jīng)有很多，目前我國相關(guān)報道還比較少。要全面認(rèn)識我國AstV感染的臨床及流行病學(xué)特點，還有待進(jìn)行深入研究。1995年程緒杰等首次在我國從腹瀉患兒糞便中分離到腸道腺病毒。EAdv感染呈全球性分布，世界各地均有報道，暴發(fā)流行的報道亦多見。國內(nèi)曹衛(wèi)中等報道崇明縣一起EAdv弓l起的感染性腹瀉暴發(fā)。
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