[發(fā)明專利]三重熒光定量RT-PCR檢測試劑盒及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110085320.8
• 申請日: 2011-04-06
• 公開（公告）號: CN102206713A
• 公開（公告）日: 2011-10-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳瑜;李蘭娟;崔大偉
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種三重實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含：定量RT-PCR反應液、札如病毒標準品、星狀病毒標準品、腺病毒標準品、陽性對照品、陰性對照品，盒體（7）設有容器孔，分別放置熒光定量RT-PCR反應液管（1）、札如病毒標準品管（2）、星狀病毒標準品管（3）、腺病毒標準品（4）、陽性對照品管（5）、陰性對照品管（6），其中熒光定量RT-PCR反應液管包含RT-PCR反應緩沖液管、上下游引物同管裝的三種病毒通用引物管、相應的三種熒光探針管和含RNA酶抑制劑、莫洛尼氏鼠白血病病毒逆轉錄酶和耐熱DNA聚合酶的酶混合物管，RT-PCR反應緩沖液管內含氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物，

三重熒光定量RT-PCR檢測用上游引物和下游引物以及相應的特異性熒光探針序列如下：

上游引物札如病毒-FP:?5’-?CAACTATGACCAGGCTCTCGC-3’

下游引物札如病毒-RP:?5’-?GCCCTCCATYTCRAACACTA-3’

特異性探針札如病毒-P:?5’-?FAM?-?CTTGGTTYATAGGYGGTACA?-BHQ1-3’

上游引物星狀病毒-FP:?5’-AATACGGACGCAACAAACGTC-3’???

下游引物星狀病毒-RP:?5’-GTCCTGTGACACCCTGTTTCC-3’?????

特異性探針星狀病毒-P?:?5’?-VIC?-AGTCTAATCAACGTGTCCGTAACATTGTC-BHQ1-3’

上游引物腺病毒-FP:?5’-CCCTGCTTTATCTTCTTTTCGAAG-3’???

下游引物腺病毒-RP:?5’-GAGAACGGTGTGCGCAGG-3’?????

特異性探針腺病毒-P?:?5’?-ROX?-CACCAGCCACACCGCGGC-BHQ1-3’

所述的札如病毒、星狀病毒和腺病毒基因標準品序列如下：

札如病毒標準品序列為：

CAACTATGAC?CAGGCTCTCG?CCACCTACGA?ATCTTGGTTC?ATAGGTGGTA?CAGGCCTGGT?ACAAGGTAGC?CCCAGTGAAG?AGACCACCAA?ATTAGTGTTT?GAAATGGAG??GGC????

星狀病毒標準品序列為：

aatacggacg?caacaaacgt?cagtctaatc?aacgtgtccg?taacattgtc?aataagcaac??tcaggaaaca??gggtgtcaca??ggac

腺病毒標準品序列為：

CCCTGCTTTA?TCTTCTTTTC?GAAGTCTTCG?ACGTGGTCAG?AGTGCACCAG?CCACACCGCG??GCGTCATCGA??GGCCGTCTAC??CTGCGCACAC??CGTTCTC。

2.根據權利要求1所述的一種三重實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為高溫高壓滅菌的高壓后焦碳酸二乙酯處理水，陽性對照為札如病毒、星狀病毒和腺病毒的陽性質粒。

3.根據權利要求1所述的一種三重實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒保存于-20℃。

4.根據權利要求1所述的一種三重實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒在檢測札如病毒、星狀病毒和腸道腺病毒中的應用。