[發明專利]一種實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的方法有效
| 申請號： | 201110084977.2 | 申請日： | 2011-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN102206709A | 公開（公告）日： | 2011-10-05 |
| 發明（設計）人： | 羅寶正;薄清如;廖秀云;沙才華;徐海聶;王振全;陳軒;蘇惠龍 | 申請（專利權）人： | 珠海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 廣州三環專利代理有限公司 44202 | 代理人： | 溫旭 |
| 地址： | 519015 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 實時 熒光 定量 rt pcr 檢測 csfv 方法 | ||
1.一種用于實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的特異性引物，其特征在于，CSFV的特異性引物序列如SEQ?NO.1-2所示。
2.一種用于實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的特異性探針，其特征在于，CSFV的特異性探針序列如SEQ?NO.3所示。
3.根據權利要求2所述的用于實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的特異性探針，其特征在于，所述CSFV特異性探針的5'端標記發光基團FAM，3'端標記泯滅基團BHQ1。
4.一種使用如權利要求1所述的特異性引物和如權利要求2所述的特異性探針的實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S100、樣品的預處理：對采集的樣品分別進行編號，在樣品中加適量青、鏈霉素雙抗溶液，勻漿，取上清，4℃過夜；
S200、RNA提取：對采集的樣品提取RNA；
S300、CSFV實時熒光定量RT-PCR反應：以上述步驟所提取的RNA為模板，加入CSFV特異性引物和特異性探針，使用TAKARA公司的一步法RT-PCR試劑盒進行PCR擴增；
S400、根據CSFV實時熒光定量RT-PCR反應結果，鑒定樣品中是否含有CSFV。
5.根據權利要求4所述的實時熒光定量RT-PCR檢測CSFV的方法，其特征在于，所述步驟S300中的實時熒光定量RT-PCR反應體系為25?μL，每條特異性引物終濃度為0.2μmol/L，特異性探針濃度為0.1μmol/L；
反應條件為42℃?30min，92℃?2min，92℃?10s，55℃?30s，40個循環。
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