[發(fā)明專利]檢測牛腸道病毒和口蹄疫病毒的核苷酸序列和檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110084546.6
• 申請日: 2011-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN102181578A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳丹;張鶴曉;吳濤;高志強(qiáng);周琦;劉來福;蒲靜;張偉;汪琳;谷強(qiáng);張向東;喬彩霞;柏亞鐸;段向英;齊瑋;郭錚蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

1.一組檢測牛腸道病毒和口蹄疫病毒的核苷酸序列，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：4，其中序列SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2分別為檢測牛腸道病毒的正義引物和反義引物；序列SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4分別為檢測口蹄疫病毒的正義引物和反義引物。

2.一種檢測牛腸道病毒和口蹄疫的檢測試劑盒，其特征在于，由以下組分組成：

1）裂解液；

2）RT-PCR反應(yīng)液，包括：PCR緩沖液、RT緩沖液、MgCL_2?、dNTP、牛腸道病毒正義引物、牛腸道病毒反義引物、口蹄疫病毒正義引物、口蹄疫病毒反義引物；

3）反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV；

4）Taq?DNA聚合酶；

5）DEPC水；

6）陰性對(duì)照：牛腸道病毒和口蹄疫病毒陰性組織樣品，用0.01mol/L?pH7.2?PBS緩沖鹽水制成20％懸液，70℃作用1小時(shí)；

7）牛腸道病毒陽性對(duì)照：為體外轉(zhuǎn)錄的非感染性RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.5所示的核苷酸序列；

8）口蹄疫病毒陽性對(duì)照：為體外轉(zhuǎn)錄的非感染性RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列；

其中，牛腸道病毒正義引物為序列表SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列，牛腸道病毒反義引物為序列表SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列，口蹄疫病毒正義引物為序列表SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列，口蹄疫病毒反義引物為序列表SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測牛腸道病毒和口蹄疫病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR反應(yīng)液包括1×PCR緩沖液、1×RT緩沖液、3mM?MgCL₂、0.2mM?dNTP、0.2?μM牛腸道病毒正義引物、0.2?μM牛腸道病毒反義引物、0.2?μM口蹄疫病毒正義引物、0.2?μM口蹄疫病毒反義引物。

4.一種檢測牛腸道病毒和口蹄疫病毒的檢測試劑盒，其特征在于，由以下組分組成：

1）裂解液；

2）RT-PCR反應(yīng)液，包括：牛腸道病毒正義引物、牛腸道病毒反義引物、口蹄疫病毒正義引物、口蹄疫病毒反義引物；

3）RT-PCR酶顆粒；

4）DEPC水；

5）陰性對(duì)照：牛腸道病毒和口蹄疫病毒陰性組織樣品，用0.01mol/L?pH7.2?PBS緩沖鹽水制成20％懸液，70℃作用1小時(shí)；

6）牛腸道病毒陽性對(duì)照：為體外轉(zhuǎn)錄的非感染性RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.5所示的核苷酸序列；

7）口蹄疫病毒陽性對(duì)照：為體外轉(zhuǎn)錄的非感染性RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列；

其中，牛腸道病毒正義引物為序列表SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列，牛腸道病毒反義引物為序列表SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列，口蹄疫病毒正義引物為序列表SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列，口蹄疫病毒反義引物為序列表SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測牛腸道病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR反應(yīng)液包括0.2?μM牛腸道病毒正義引物、0.2?μM牛腸道病毒反義引物、0.2?μM口蹄疫病毒正義引物、0.2μM口蹄疫病毒反義引物。