[發明專利]AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高三分三毛狀根中托品烷生物堿含量的方法

無效

• 申請號: 201110083462.0
• 申請日: 2011-04-02
• 公開（公告）號: CN102212548A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 開國銀;楊勝;周文濤;羅秀芹;劉源云
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/06
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高托品烷生物堿含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將腐胺N-甲基轉移酶基因AaPMT和托品酮還原酶I基因AaTRI，插入植物表達載體，構建重組載體；所述的腐胺N-甲基轉移酶基因和托品酮還原酶I基因序列分別為SEQ?ID：1和SEQ?ID：2的DNA序列；

(2)將步驟(1)所獲得的重組載體轉入發根農桿菌，構建含有重組載體的發根農桿菌；

(3)用步驟(2)所得含有重組載體的發根農桿菌介導腐胺N-甲基轉移酶基因和托品酮還原酶I基因轉化三分三，獲取毛狀根；

(4)檢測步驟(3)毛狀根中的腐胺N-甲基轉移酶基因和托品酮還原酶I基因，取篩選結果為陽性的轉基因毛狀根。

2.權利要求1所述AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高脫品烷生物堿的含量的方法，其特征在于，所述其特征在于，步驟(1)所述的植物表達載體為pCAMBIA質?；騪BI質粒。

3.權利要求1所述AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高脫品烷生物堿含量的方法，其特征在于，所述其特征在于，步驟(2)所述發根農桿菌為發根農桿菌菌株C58C1、發根農桿菌菌株A4或發根農桿菌菌株LBA9402。

4.權利要求1所述AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高脫品烷生物堿的含量的方法，其特征在于，步驟(3)用含有重組載體的發根農桿菌菌株遺傳轉化三分三的外植體，獲得毛狀根。

5.權利要求1所述AaPMT和AaTRI雙基因共轉化提高脫品烷生物堿含量的方法，其特征在于，步驟(4)所述檢測方法為PCR檢測、半定量和定量RT-PCR測定。

6.一種用于提高脫品烷生物堿含量的重組載體，其特征在于，含有腐胺N-甲基轉移酶基因和托品酮還原酶I基因。