[發明專利]高比活耐熱N-酰基高絲氨酸內酯酶AiiA-AIO6及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201110082565.5
• 申請日: 2011-04-01
• 公開（公告）號: CN102212508A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 周志剛;張美超;曹雅男;何夙旭;毛瑋;張宇婷;霍鳳敏;徐俐
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12N15/11;A01N63/02;A01P1/00;C12R1/01;C12R1/91;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種高比活耐熱N-酰基高絲氨酸內酯酶AiiA-AIO6及其編碼基因與應用。

背景技術

群體感應(quorum?sensing，QS)是細菌的一種調控機制，指細菌通過感應特定信號分子的濃度來感知周圍環境中自身或其它細菌的數量，并調整相關基因的表達以適應環境的變化，這些特定的信號分子(又稱為自誘導物)。

革蘭氏陰性細菌中典型的QS系統包括負責信號產生的luxI類基因、反應調節因子luxR類基因和LuxR蛋白結合區luxbox。革蘭氏陰性菌群體感應系統中最典型的一類信號分子是N-酰基-高絲氨酸內酯(N-acyl-homoserine?lactones，AHLs)類化合物。細菌細胞通過產生AHLs進行信息交流，調控某些特定生理性狀的表達。

隨著對QS系統的深入研究，發現多種革蘭氏陰病原細菌的重要生理過程，包括毒性因子在內的次生代謝物的產生等均受QS系統的調控。如對人類主要條件致病菌銅綠假單胞菌芯片分析表明，在基因組中300多個基因受QS系統調控，其中包括了形成胞外蛋白酶、毒素和脂肪酶等致病因子表達的基因。再如引起植物軟腐病的重要致病菌胡蘿卜果膠桿菌(Pectobacterium?carotovorum)中，QS系統調控了包括合成和分泌能降解植物細胞壁的水解酶的表達及其它與寄主植物互作的毒性因子的產生。因此可以利用QS系統作為細菌病害防治的新靶點。

目前已將干擾QS系統中AHL信號分子的合成作為生物防治革蘭氏陰性病原菌的新靶標。而利用QS調控系統控制細菌病害的途徑之一是尋找能降解信號分子的酶，使AHL信號分子不能達到調控的臨界濃度以阻斷細菌間的信息交流從而防止病原菌的感染。目前已報道的N-酰基高絲氨酸內酯酶，比活力較低且耐熱性較差，限制了其應用價值。因此，發掘比活力更高、耐熱性更好的新酶，成為目前研究的一個重要方向。

發明內容

本發明公開了一種高比活耐熱N-酰基高絲氨酸內酯酶AiiA-AIO6及其編碼基因與應用。

本發明所提供的蛋白(AiiA-AIO6蛋白)，來自蒼白桿菌(Ochrobactrum?sp.)，具有N-酰基高絲氨酸內酯酶功能，為如下(a)或(b)或(c)：

(a)序列表中序列1自N末端第2至269位氨基酸殘基組成的蛋白質；

(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(c)將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有N-酰基高絲氨酸內酯酶功能的由序列1衍生的蛋白質。

為了使(a)或(b)或(c)中的AiiA-AIO6蛋白便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。

表1標簽的序列