[發(fā)明專利]一種微生物轉(zhuǎn)化制備(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110081009.6
• 申請(qǐng)日: 2011-04-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102732579A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈文和;歐志敏;車(chē)大慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江九洲藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P13/02
• 分類號(hào): C12P13/02;C12N1/18;C12R1/865
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物轉(zhuǎn)化方法領(lǐng)域，具體涉及一種生物催化制備(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法。

背景技術(shù)

(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇，英文名：((3S)-3-(tert-Butoxycarbonyl)amino-1-chloro-4-phenyl-(2R)-butanol)，CAS號(hào)：162536-40-5，分子式C₁₅H₂₂NClO₃，分子量299.79。(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇是制備抗艾滋病藥物阿扎那韋的關(guān)鍵中間體。阿扎那韋是一新型氮雜肽類蛋白酶抑制劑(PI)，是根據(jù)酶-氮雜肽復(fù)合物的X射線衍射研究設(shè)計(jì)而成的，具有C-2對(duì)稱的化學(xué)結(jié)構(gòu)。它是HIV-1蛋白酶的高選擇性和高效的抑制劑，通過(guò)阻斷病毒gap和gap-pol前體多聚蛋白的裂解，從而抑制病毒結(jié)構(gòu)蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶的生成，使HIV-1感染的細(xì)胞釋放出非感染性的不成熟的病毒顆粒。本品對(duì)多株HIV-1病毒具有比其他PI更強(qiáng)的抑制活性，在體外培養(yǎng)基中半數(shù)有效濃度(EC50)為2.6～5.3?nmol/L，90%有效濃度(EC90)為9～15?nmol/L。

拆分外消旋體(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-丁醇，可以獲得(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇，但是拆分效率最大只有50%，生產(chǎn)效率不高。以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮為底物采用化學(xué)法和微生物法不對(duì)稱還原底物中的羰基均可以得到(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。而化學(xué)法不對(duì)稱還原需要制備手性化學(xué)催化劑，價(jià)格昂貴，制備過(guò)程繁瑣，且通常環(huán)境污染較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種微生物轉(zhuǎn)化制備(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法，該方法反應(yīng)條件溫和，操作簡(jiǎn)便，環(huán)境友好，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。?????????????????????????????????????????????????????

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種微生物轉(zhuǎn)化制備(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法，所述方法是以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮為底物，以釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）CGMCC?No.?2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細(xì)胞為生物催化劑，進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)制得所述(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。

所述釀酒酵母CGMCC?No.2266，已在先前授權(quán)專利200810059686中作為新菌株予以保護(hù)，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物保藏中心，位于北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所內(nèi)，保藏號(hào)CGMCC?No.2266，保藏日期2007年11月26?日。?

所述釀酒酵母CGMCC?No.2266的菌落特征：在瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)出乳白色、有光澤、平坦、邊緣整齊、濕潤(rùn)、表面光滑，質(zhì)地均勻的菌落形態(tài)。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的微生物轉(zhuǎn)化制備(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法為：以pH?5.0~8.0的磷酸鹽緩沖液為反應(yīng)溶劑，以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮為底物、以釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）CGMCC?No.?2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細(xì)胞為生物催化劑，于25~45℃下轉(zhuǎn)化反應(yīng)12~72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)化液經(jīng)分離純化得到所述(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。

所述的(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮在磷酸鹽緩沖液中的初始終濃度為0.1~1?mmol/L。