[發(fā)明專利]一種藥敏試劑盒的制備方法以及藥敏檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110072051.1
• 申請日: 2011-03-24
• 公開（公告）號: CN102199530A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王建平;邱軍強(qiáng);孫琪;呂利群;楊先樂;宋增福;樂韻;吳雄飛
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波市海洋與漁業(yè)研究院
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/02
• 代理公司: 寧波天一專利代理有限公司 33207
• 代理人: 章翠云

1.?一種藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于所述的藥敏試盒包括裝有增菌培養(yǎng)液的離心管、裝有固體培養(yǎng)基的的培養(yǎng)皿以及藥敏貯藥圈；

裝有增菌培養(yǎng)液的離心管的制備：

a、將重量配比為5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化納倒入已裝有600-1000份蒸餾水的燒杯中，攪拌均勻；

b、往燒杯中倒入鹽酸或氫氧化納，將燒杯中的溶液PH值調(diào)整到7.3±0.1，配制成增菌培養(yǎng)液；

c、將燒杯中的溶液倒入可調(diào)式分液器，通過可調(diào)式分液器將增菌培養(yǎng)液注入離心管內(nèi)，將蓋子旋上但不旋緊，留半圈至一圈；

d、將裝有增菌培養(yǎng)液的離心管放在試管架上，再放入自動高壓滅菌鍋內(nèi)，高壓滅菌10-20分鐘；

e、滅菌結(jié)束后將離心管取出，然后旋緊離心管的管蓋，放入真包裝袋內(nèi)抽真空；

裝有固體培養(yǎng)基的的培養(yǎng)皿的制備：

a、將重量配比為5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化納、10-15份的瓊脂倒入已裝有600-1000份蒸餾水的三角燒瓶中，攪拌均勻；

b、往三角燒瓶中倒入鹽酸或氫氧化納，將燒杯中的溶液PH值調(diào)整到7.3±0.1，制成培養(yǎng)液；

c、將三角燒瓶放入自動高壓滅菌鍋內(nèi)，高壓滅菌10-20分鐘；

d、在超凈臺內(nèi)對自動分液器的儲液漏斗消毒，然后將冷卻到55-65度的培養(yǎng)液倒入自動分液器的儲液漏斗內(nèi)，分裝到培養(yǎng)皿中；

e、將培養(yǎng)皿平放于超凈臺上，并打到超凈臺紫外燈，使培養(yǎng)液冷卻凝固成固體培養(yǎng)基；

f、將培養(yǎng)皿的蓋子蓋上，然后裝入真空包裝袋抽成真空；

藥敏貯藥圈的制備：

制作15-20種藥物的藥敏紙片，將藥敏紙片粘貼于貯藥圈的正面，然后裝入真空包裝袋抽成真空。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于在裝有增菌培養(yǎng)液的離心管的制備的步驟b中加入海水晶或者濃縮海水后，調(diào)整鹽度到24-28之間，pH6.8-7.2之間，配制成增菌培養(yǎng)液；在裝有固體培養(yǎng)基的的培養(yǎng)皿的制備的步驟b中加入海水晶或者濃縮海水后，調(diào)整鹽度到24-28之間，pH6.8-7.2之間，配制成培養(yǎng)液。

3.一種根據(jù)權(quán)利要求1和2制備的藥敏試劑盒的藥敏檢測方法，其特征在于

a、準(zhǔn)備：將手、剪刀和解剖容器清洗干凈，并用75%醫(yī)用酒精、水煮或火燒等形式對剪刀和解剖容器進(jìn)行消毒；

b、取樣：選病癥典型的瀕死魚蝦等個體，清水洗凈解剖部位；用剪刀解剖，觀察病變，再次消毒剪刀后，剪取約黃豆大小的典型病灶直接放入裝有增菌培養(yǎng)液的離心管，并旋緊離心管管蓋，若檢測水樣，則直接取5-10滴水樣滴入裝有增菌培養(yǎng)液的離心管內(nèi)，并旋緊離心管管蓋；

c、液體培養(yǎng)：用力振蕩離心管數(shù)次后放置，且應(yīng)避免陽光直射，之后每隔半個小時至1個小時用力振蕩離心管數(shù)次，直到液體混濁；

d、涂布：將離心管內(nèi)液體倒入裝有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中心部位，應(yīng)避免倒入離心管底的沉淀物，然后用涂布棒輕輕地在固體培養(yǎng)基上將液體涂抹均勻，并應(yīng)避免將固體培養(yǎng)基表面劃破；

e、貼藥敏貯藥圈：將培養(yǎng)皿敞蓋平放晾干，至表面基本干燥，然后取出藥敏圈，將藥敏紙片朝下放入培養(yǎng)盒中，輕壓，使紙片與培養(yǎng)基表面充分接觸，蓋上培養(yǎng)皿的蓋子后倒扣，靜置于溫度在20度以上的地方8-15小時；

f、結(jié)果判定：

1）、出現(xiàn)透明區(qū)的藥敏貼片中的藥物均可作為備選藥物，透明區(qū)較大的藥敏貼片中的藥物可作為優(yōu)選藥物，綜合考慮本類病害的常用藥種類、用藥史、藥價、給藥方式、進(jìn)出口規(guī)定的因素，選出最合適的抗生素；?

2）、如未長出細(xì)菌或細(xì)菌呈斑點(diǎn)狀散布，則表明病害可能不是由細(xì)菌感染引起；

3）、如細(xì)菌已布滿整個培養(yǎng)盒，但未出現(xiàn)透明區(qū)，則表明在藥敏貯藥圈上的所有藥敏貼片中的藥物在標(biāo)準(zhǔn)使用劑量時對致病菌無效，建議其他產(chǎn)品重新進(jìn)行選藥。