[發明專利]一種藥敏試劑盒的制備方法以及藥敏檢測方法

無效

• 申請號: 201110072051.1
• 申請日: 2011-03-24
• 公開（公告）號: CN102199530A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 王建平;邱軍強;孫琪;呂利群;楊先樂;宋增福;樂韻;吳雄飛
• 申請（專利權）人: 寧波市海洋與漁業研究院
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/02
• 代理公司: 寧波天一專利代理有限公司 33207
• 代理人: 章翠云

技術領域

本發明涉及一種用于水產養殖的藥敏試劑盒以及藥敏檢測方法，具體的說是一種用于淡水養殖或海水養殖時檢測病體或水樣的藥敏試劑盒的制備方法以及藥敏檢測方法。

背景技術

由于養殖密度過大、環境惡化和其它多種原因，導致近年來水產養殖細菌性疾病頻發，造成巨大的經濟損失。由于養殖者科學知識的缺乏和市場經濟利益的驅使，濫用漁藥特別是抗生素的現象普遍存在，導致水產致病菌的耐藥性、水產品藥殘、環境污染及生態破壞等問題日益加劇。要從源頭上解決抗生素濫用問題，關鍵是在治療前進行藥敏試驗，從而在正確診斷的基礎上對癥下藥。國際上常用的藥敏試驗方法是K-B紙片法。采用這種方法進行藥敏試驗要求將致病菌分離純化，需要花一周左右的時間，而且必須在專業的微生物實驗室條件下，由具備專業知識的人員完成，因此不適合在廣大養殖者中推廣。中國專利局于2007年2月28日公開的，授權公告號為“CN2874498Y”的“藥敏檢測盒”，它用于動物疫病診斷檢測，包括帶檢測孔1的檢測盒2上蓋有檢測盒蓋3，在檢測盒2底面上刻有測量刻度4。它通過各種藥物，直接按照試驗目的加入檢測孔中即可進行藥敏試驗。這種檢測盒由于病毒、細菌沒有培養，所獲取的病毒、細菌有限，根本無法進行有效的檢測。

發明內容

本發明的目的在于針對上述現有技術的缺陷和不足，為人們提供一種操作簡便，價格適中，適用于水產基層作為防治淡水細菌性疾病的選藥工作的藥敏試劑盒的制備方法以及使用該藥敏試劑盒進行藥敏檢測的方法。

為實現上述目的本發明所采取的技術方案是：一種藥敏試劑盒的制備方法，所述的藥敏試盒包括裝有增菌培養液的離心管、裝有固體培養基的的培養皿以及藥敏貯藥圈。

裝有增菌培養液的離心管的制備：

a、將重量配比為5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化納倒入已裝有600-1000份蒸餾水的燒杯中，攪拌均勻；

b、往燒杯中倒入鹽酸或氫氧化納，將燒杯中的溶液PH值調整到7.3±0.1，配制成增菌培養液；

c、將燒杯中的溶液倒入可調式分液器，通過可調式分液器將增菌培養液注入離心管內，將蓋子旋上但不旋緊，留半圈至一圈；

d、將裝有增菌培養液的離心管放在試管架上，再放入自動高壓滅菌鍋內，高壓滅菌10-20分鐘；

e、滅菌結束后將離心管取出，然后旋緊離心管的管蓋，放入真包裝袋內抽真空。

裝有固體培養基的的培養皿的制備：

a、將重量配比為5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化納、10-15份的瓊脂倒入已裝有600-1000份蒸餾水的三角燒瓶中，攪拌均勻；

b、往三角燒瓶中倒入鹽酸或氫氧化納，將燒杯中的溶液PH值調整到7.3±0.1，制成培養液；

c、將三角燒瓶放入自動高壓滅菌鍋內，高壓滅菌10-20分鐘；

d、在超凈臺內對自動分液器的儲液漏斗消毒，然后將冷卻到55-65度的培養液倒入自動分液器的儲液漏斗內，分裝到培養皿中；

e、將培養皿平放于超凈臺上，并打到超凈臺紫外燈，使培養液冷卻凝固成固體培養基；

f、將培養皿的蓋子蓋上，然后裝入真空包裝袋抽成真空。

藥敏貯藥圈的制備：

制作15-20種藥物的藥敏紙片，將藥敏紙片粘貼于貯藥圈的正面，然后裝入真空包裝袋抽成真空。

在裝有增菌培養液的離心管的制備的步驟b中加入海水晶或者濃縮海水后，調整鹽度到24-28之間，pH6.8-7.2之間，配制成增菌培養液；在裝有固體培養基的的培養皿的制備的步驟b中加入海水晶或者濃縮海水后，調整鹽度到24-28之間，pH6.8-7.2之間，配制成培養液。

一種根據使用藥敏試劑盒進行藥敏檢測方法，其特征在于

a、準備：將手、剪刀和解剖容器清洗干凈，并用75％醫用酒精、水煮或火燒等形式對剪刀和解剖容器進行消毒；

b、取樣：選病癥典型的瀕死魚蝦等個體，清水洗凈解剖部位；用剪刀解剖，觀察病變，再次消毒剪刀后，剪取約黃豆大小的典型病灶直接放入裝有增菌培養液的離心管，并旋緊離心管管蓋，若檢測水樣，則直接取5-10滴水樣滴入裝有增菌培養液的離心管內，并旋緊離心管管蓋；

c、液體培養：用力振蕩離心管數次后放置，且應避免陽光直射，之后每隔半個小時至1個小時用力振蕩離心管數次，直到液體混濁；

d、涂布：將離心管內液體倒入裝有固體培養基的培養皿中心部位，應避免倒入離心管底的沉淀物，然后用涂布棒輕輕地在固體培養基上將液體涂抹均勻，并應避免將固體培養基表面劃破；