[發明專利]一種基于EGFP的T載體的制備方法

有效

• 申請號: 201110070698.0
• 申請日: 2011-03-23
• 公開（公告）號: CN102409061A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 何華綱;朱姍穎;吳春篤
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C12N15/65;C12R1/19
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種基于EGFP的T載體，其特征在于其中所述T載體的兩個末端位于組成型啟動子和EGFP基因之間，所述T載體應用于T-A克隆時，載體自連產生的假陽性菌落在日光下呈現綠色熒光，攜有外源DNA的陽性菌落呈現白色。

2.根據權利要求1所述的一種基于EGFP的T載體的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：

（1）制備含有增強型綠色熒光蛋白（EGFP）基因表達盒的前T載體pPmG1，所述表達盒包括組成型啟動子Pm、EGFP基因，以及位于兩者之間的平末端酶切位點；

（2）用相應的限制性內切酶切割所述的前T載體，利用Taq?DNA聚合酶將dTTP合成到線性化前T載體pPmG1的3’末端，使之具有凸起的T尾，制備成熟的T載體。

3.根據權利要求1所述的一種基于EGFP的T載體的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：

（1）制備含有增強型綠色熒光蛋白（EGFP）基因表達盒的前T載體pPmG2，所述表達盒包括組成型啟動子Pm、EGFP基因，以及位于兩者之間的兩個串聯的Xcm?I酶切位點；

（2）用限制性內切酶Xcm?I切割所述的前T載體pPmG2，直接獲得在3’末端具有凸起的T尾的成熟的T載體。