[發明專利]一種從土壤中提取總DNA的方法無效
| 申請號： | 201110067707.0 | 申請日： | 2011-03-21 |
| 公開（公告）號： | CN102181433A | 公開（公告）日： | 2011-09-14 |
| 發明（設計）人： | 肖弘 | 申請（專利權）人： | 肖弘 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭國中 |
| 地址： | 201100 上海市閔*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 土壤 提取 dna 方法 | ||
1.一種從土壤中提取總DNA的方法，其特征在于，包括：
（a）、取土壤試樣，加1.5ml提取液，混勻，其中，所述土壤試樣與提取液的質量體積比為1:2.5~3.5，所述提取液含有：50~200nM?Tris，50~150nM?EDTA，100~200nM?NaCl，5~8wt%TEEPOL，pH為8.5~9.5；
（b）、置于-70~-85℃冷凍20~30min后取出于60~70℃水浴融化，如此反復凍融數次；
（c）、加入8~12mg/ml的蛋白酶K80~120ml震蕩25~35min，加入濃度為18~22%的SDS?180~230ml，置于60~70℃水浴1.5~2.5hr，離心收集上清；
（d）、所述上清加0.4~0.6倍體積的濃度為40~60w/v%的PEG混勻，靜置沉淀；
（e）、離心取沉淀，加入0.5~1ml?TE溶解，用等體積的氯仿/異戊醇抽提，離心，取上清；
（f）、用0.1~0.2倍體積的2~4mol/l的NaAc，以及0.5~0.8倍體積的冷異丙醇室溫沉淀后離心；
（g）、沉淀用60~80%(體積)乙醇洗滌，離心取沉淀，即得到總DNA。
2.如權利要求1所述的從土壤中提取總DNA的方法，其特征在于，所述凍融次數為3~5次。
3.如權利要求1所述的從土壤中提取總DNA的方法，其特征在于，所述步驟c中所述離心的條件為：室溫5500~6500r/min，離心8~15min。
4.如權利要求1所述的從土壤中提取總DNA的方法，其特征在于，所述步驟e、f、g中所述離心的條件均為：室溫10000~15000r/min，離心15~25min。
5.如權利要求1所述的從土壤中提取總DNA的方法，其特征在于，所述氯仿/異戊醇的體積比為20~30:1。
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