[發(fā)明專利]抑制肺轉(zhuǎn)移腫瘤生長的siRNA及其寡聚核酸組合與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110062114.5
• 申請日: 2011-03-15
• 公開（公告）號: CN102178959A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發(fā)明（設計）人: 李建娜;張雅鷗;謝偉東;何杰;張佩琢
• 申請（專利權(quán)）人: 清華大學深圳研究生院;上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抑制肺轉(zhuǎn)移腫瘤生長的siRNA及其寡聚核酸組合與應用。

背景技術(shù)

微小核酸(miRNA)是一類高度保守的非編碼小核酸，廣泛存在于動物植物和病毒中。miRNA通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因的表達，進而調(diào)節(jié)機體重要的生理與病理過程。微小核酸與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在腫瘤組織和與正常組織間的表達明顯不同。miRNA既可以作為原癌基因促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展，又能作為抑癌基因抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，根據(jù)miRNA調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同機理，將它們組成不同的配方或?qū)⑺鼈兣c其它抗腫瘤的小干擾RNA(siRNA)組成不同的配方，將比單一的miRNA更能有效地治療腫瘤性疾病。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種寡聚核酸在制備抑制肺轉(zhuǎn)移腫瘤生長的試劑中的應用。

本發(fā)明所述的寡聚核酸是如下1)-4)中任一所述的雙鏈RNA：

1)序列表中序列1和序列2組成的寡聚核酸；

2)所述1)的寡聚核酸與PTN-siRNA組成的雙寡聚核酸，所述PTN-siRNA是序列表中序列3和序列4組成的寡聚核酸；

3)所述1)的寡聚核酸與miR-34a組成的雙寡聚核酸，所述miR-34a是序列表中序列5和序列6組成的寡聚核酸；

4)所述1)的寡聚核酸與VEGF-siRNA組成的雙寡聚核酸，所述VEGF-siRNA是序列表中序列7和序列8組成的寡聚核酸。

上述2)的雙寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸與PTN-siRNA的質(zhì)量比是(0.5-2)∶(0.5-2)，優(yōu)選是1∶1。

上述3)的雙寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸與miR-34a的質(zhì)量比是(0.5-2)∶(0.5-2)，優(yōu)選是1∶1。

上述4)的雙寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸與VEGF-siRNA的質(zhì)量比是(0.5-2)∶(0.5-2)，優(yōu)選是1∶1。

進一步，上述1)-4)中的寡聚核酸均是經(jīng)過如下a)或b)或c)修飾得到的寡聚核酸：

a)對所述寡聚核酸的連接核苷酸的磷酸二酯鍵進行修飾，優(yōu)選將所述磷酸二酯鍵的氧用硫取代；

b)對所述寡聚核酸的核糖的2’-OH的修飾，優(yōu)選將所述2’-OH用甲氧基或氟取代或者對所述2’-OH進行脫氧修飾；

c)對所述寡聚核酸5’端連上膽固醇的修飾。

上述序列表中序列1、3、5、7、9從左至右方向為5’-3’，序列表中序列2、4、6、8、10從左至右方向為3’-5’。

上述腫瘤是腸癌、鼻咽癌、宮頸癌、肝癌、乳腺癌或肺癌。

上述試劑可以包含上述寡聚核酸分子中的至少一種以及至少一種藥學上可接受的載體。本文所用的“藥學上可接受的載體”應當與本發(fā)明試劑中的雙鏈RNA分子相容。在一個優(yōu)選實施例中，所述“藥學上可接受的載體”是指體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑，如聚乙烯亞胺(PEI)，jetPEI(線性聚乙烯亞胺)，TF-PEI(轉(zhuǎn)鐵蛋白聚乙烯亞胺)脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)鐵蛋白，葉酸等。

所述寡聚核酸為化學合成，可以進行2′氟代(2′-F)、2′甲氧基(2′-OMe)、硫代(PS)和2′脫氧(2′-deoxy)化學修飾，也可以在5’端連上膽固醇修飾。

用化學合成并修飾的上述寡聚核酸分子轉(zhuǎn)染鼻咽癌細胞株CNE形成的肺轉(zhuǎn)移瘤腫瘤細胞的實驗結(jié)果表明miR-210、siPTN、miR-210+siVEGF、miR-34a+miR-210、miR-210+siPTN這幾組均可以有效的抑制肺轉(zhuǎn)移瘤的生長。

作為新型小核酸類的抗腫瘤藥物，化學合成并修飾的所述寡聚核酸不易被降解，有較長的效應半衰期，能用于體外實驗，更能用于體內(nèi)治療。

附圖說明

圖1為2′-F-siPTN及其寡聚核酸治療抑制肺轉(zhuǎn)移瘤形成的肺部壓片效果圖。

圖2為2′-F-siPTN及其寡聚核酸組合治療鼻炎癌肺轉(zhuǎn)移6次以后肺部轉(zhuǎn)移灶統(tǒng)計柱形圖。

圖3為2′-F-siPTN及其寡聚核酸組合治療鼻炎癌肺轉(zhuǎn)移組織切片圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。

下述實施例中，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

實施例1、寡聚核酸的制備