[發(fā)明專利]一種多菌靈單克隆抗體及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110057555.6
• 申請日: 2011-03-10
• 公開（公告）號: CN102675463A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 王金花;曾靜;李小林;盧曉宇;韓深;張蓉;劉韋華;魏海燕
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

1.多菌靈的單克隆抗體，由保藏編號為CGMCC?No.?4575的小鼠雜交瘤細胞株MC-3產生。

2.能分泌抗多菌靈單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株MC-3，其保藏編號為CGMCC?No.?4575。

3.一種制備權利要求1所述多菌靈的單克隆抗體的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）在多菌靈的第9位氨基酸殘基引入1個氨基，得到經氨基修飾的多菌靈，再將該經氨基修飾的多菌靈與載體蛋白偶聯(lián)得到完全抗原A；

（2）將步驟（1）的完全抗原A免疫小鼠，取免疫小鼠的脾細胞，與小鼠骨髓瘤細胞融合，篩選出陽性雜交瘤細胞株；擴大培養(yǎng)該陽性雜交瘤細胞株，將陽性細胞株注入同系小鼠腹腔誘導產生腹水，得到多菌靈的單克隆抗體。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，采用乙二醇法在多菌靈的第9位氨基酸殘基引入1個氨基。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，載體蛋白為鑰孔血藍蛋白。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，用于免疫的小鼠為Balb/C小鼠；免疫方法為：每只小鼠每次免疫所用的完全抗原A量為40~80μg，兩次免疫的間隔時間為20~30天；免疫方式為皮下多點注射；

所述步驟（2）中，小鼠骨髓瘤細胞為小鼠骨髓瘤細胞sp2/0。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，篩選陽性雜交瘤細胞株的方法為：先用包被抗原篩選1~2次，再用偶聯(lián)有載體蛋白的無關小分子篩選至少1次；所述包被抗原為所述步驟（1）中的多菌靈與載體蛋白偶聯(lián)得到的完全抗原B；所述完全抗原B與所述完全抗原A中的載體蛋白不相同。

8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述陽性雜交瘤細胞株為能分泌抗多菌靈單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株MC-3，其保藏號為CGMCC?No.?4575。

9.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括純化所述多菌靈單克隆抗體的步驟。

10.權利要求1所述多菌靈的單克隆抗體在檢測多菌靈中的應用。